Kefiran: antagonismos de los efectos asociados a la interacción de Bacillus cereus con enterocitos humanos en cultivo

MEDRANO, M.; HAMET, M. F.; ABRAHAM, A. G. Y PÉREZ, P. F.

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso de Ciencia y Tecnología de Alimentos. II Simposio Internacional de Nuevas Tecnologías.; 2007

Bacillus cereus es un microorganismo G(+) que frecuentemente contamina alimentos debido a su capacidad de formar esporos. La síntesis de diversas toxinas (producidas tanto en el alimento como en el intestino) causan en el hombre dos tipos de síndrome: emético y diarreico. El kefiran es un glucogalactano ramificado hidrosoluble (PM mayor a 107 Da) producido por los microorganismos presentes en gránulos de kefir.  Debido a las uniones que presenta, no puede ser digerido por enzimas gástricas, con lo cual podría llegar intacto al intestino. En estudios anteriores hemos demostrado que el kefiran es capaz de proteger enterocitos humanos en cultivo del efecto citopático asociado a la presencia de toxinas en sobrenadantes de cultivo de B.cereus. Dado que la capacidad del bacilo de adherirse a epitelio intestinal constituye un factor adicional de virulencia, el objetivo del presente trabajo fue evaluar si la presencia de kefiran interfiere en la adhesión del bacilo a los enterocitos así como también en el efecto citopático asociada a dicha interacción. Se utilizó kefiran de gránulo extraído mediante precipitación con etanol, en una concentración de 800 mg/L. Se emplearon enterocitos diferenciados de la línea Caco-2,  incubados durante diferentes tiempos (de acuerdo al efecto citopático evaluado en cada caso) con células vegetativas de B. cereus cepa B10502 en presencia y ausencia de kefiran. Para cuantificar el número de bacilos adheridos después del tratamientos se realizaron recuentos en placa. Las células intestinales se tiñeron con la técnica de May Grumwald-Giemsa para observar alteraciones morfológicas. Para observar desorganización del citoesqueleto se tiñeron con FITC-faloidina. Se realizó una microscopía electrónica de barrido. Se cuantificó el porcentaje de los enterocitos que permanecieron adheridos luego de la infección mediante coloración con cristal violeta. Se evaluó el grado de necrosis mediante tinción de núcleos con ioduro de propidio. La integridad de los enterocitos se evaluó por cuantificación de la enzima lactato deshidrogenasa mitocondrial liberada al medio. La presencia de kefiran disminuyó el número de bacilos adheridos. El contacto bacilo-célula condujo a desorganización del citoesqueleto, alterando la morfología de los enterocitos (redondeo, desprendimiento, desaparición de microvellosidades) así como la inducción de necrosis. La presencia de kefiran disminuyó notablemente estos efectos. El kefiran estaría interfiriendo en la adhesión del bacilo a los enterocitos, disminuyendo el efecto biológico asociado  a este factor de virulencia. Estos resultados, unidos a la acción ya demostrada sobre el efecto de los factores exocelulares, evidencian una nueva aplicación de los exopolisacáridos bacterianos para antagonizar patógenos alimentarios relevantes en el contexto de infecciones intestinales.