Propiedades catalíticas de una actividad lipasa ligada al micelio de Aspergillus niger MYA 135

ROMERO, CINTIA MARIANA; RODRIGUEZ, EMILIO; CHALÓN, MIRIAN; PERA, LICIA MARÍA; BAIGORI, MARIO DOMINGO

Tucumán

Simposio; Simposio internacional de biotecnología; 2004

CERELA - PROIMI

MA-42 Propiedades catalíticas de una actividad lipasa ligada al micelio de Aspergillus niger MYA 135 C. M. Romero, E. Rodr¨ªguez, M. C. Chal¨®n, L.M. Pera  y M. D. Baigor¨ª. PROIMI-Biotecnolog¨ªa. Av. Belgrano y Caseros. 4000, Tucum¨¢n, Argentina. cinromero78@hotmail.com Las lipasas (triacilglicerol acilhidrolasas, EC 3.1.1.1) son enzimas de gran inter¨¦s en la industria qu¨ªmica y farmac¨¦utica debido a su capacidad de catalizar reacciones de hidr¨®lisis o de s¨ªntesis dependiendo de las condiciones de reacci¨®n. Estas enzimas son utilizadas industrialmente para la hidr¨®lisis de grasas y aceites, s¨ªntesis de ¨¦steres de ¨¢cidos grasos, resoluci¨®n de mezclas rac¨¦micas, producci¨®n de intermediarios para s¨ªntesis org¨¢nica, etc. En este trabajo informamos la determinaci¨®n de la actividad lipasa, presente el en micelio de Aspergillus niger MYA 135, y su estabilidad, a los efectos de evaluar su potencial uso en biocat¨¢lisis. El micelio se desarrolla en un agitador rotatorio a 250 rpm, a 30¡ãC en un medio (MB) que contiene (en g/l): sacarosa, 10,0; KH2PO4, 1,0; NH4NO3, 2,0; MgSO4.7H2O, 0,2; CuSO4.5H2O, 0,06; aceite de oliva, 2%; pH inicial 7. El cultivo se realiza en erlemmeyers de 500 ml, con un volumen de trabajo inicial de 100ml. A las 24 horas el micelio se trasvasa a un erlemmeyer de 500 ml conteniendo 50 ml de aceite de oliva al 3%. El in¨®culo utilizado es de 105conidios/ml. Para determinar la actividad lipasa micelial, el desarrollo se filtra, se lava primero con agua y luego con acetona, se filtra nuevamente, se fracciona en al¨ªcuotas de 0,01 g de peso h¨²medo y se mantiene a ¨C20¡ãC hasta su uso. Los ensayos de estabilidad se realizan preincubando el micelio una hora en las diferentes condiciones en estudio y determinando la actividad residual. Se eval¨²a el efecto del pH (3, 5, 6, 9), temperatura (30, 37, 40, 45, 50¡ãC) y solventes org¨¢nicos (acetona, metanol, etanol, butanol). Una unidad se define como la cantidad de enzima que libera un ¦Ìmol de pNP por minuto a 37¡ãC, en las condiciones de ensayo. La actividad espec¨ªfica se expresa en unidades por mg de peso seco. La m¨¢xima actividad lipasa micelial (5,14 U/mg) se observa al 4 to d¨ªa de fermentaci¨®n. Sin el agregado de aceite de oliva, la m¨¢xima actividad espec¨ªfica (1,60 U/mg) se alcanza al 6 to d¨ªa. La actividad residual luego de una preincubaci¨®n a pH 3, 5, 7 y 9 es de 62, 72, 72 y 23%, respectivamente. La actividad residual a 30, 37, 40, 45, y 50¡ãC es de 81, 96, 111, 100 y 100%, respectivamente. Con respecto a la estabilidad en solventes org¨¢nicos, en presencia de acetona, metanol, etanol y butanol se observa una actividad lipasa residual de 89, 68, 107 y 61%, respectivamente. Los resultados obtenidos muestran gran versatilidad para usar en diferentes solventes y condiciones de incubaci¨®n La buena estabilidad de la actividad lipasa en las condiciones ensayadas nos permite suponer su potencialidad de aplicaci¨®n en biocat¨¢lisis.