Inmunomarcación de proteínas relacionadas con la apoptosis en quistes ováricos bovinos inducidos experimentalmente

STANGAFERRO M; PALOMAR, MM; SALVETTI, NR; TABOADA AF; MAZZINI, RA; ORTEGA, HH

Cordoba

Simposio; VIII Simposio Internacional de Reproducción Animal; 2009

IRAC

Los quistes ováricos son frecuentes durante el periodo posparto en el ganado bovino lechero y son una de las principales causas de fallas reproductivas y pérdidas económicas debido a la prolongación del intervalo parto-primer celo. Se especula que el crecimiento folicular excesivo y su persistencia pueden ser debidos a un desequilibrio de los procesos de proliferación y muerte celular. El objetivo del presente estudio fue evaluar la expresión de Bcl-2, proteína anti-apoptótica, y caspasa-3, enzima efectora en la cascada de la apoptosis, en estructuras foliculares de ovarios bovinos con quistes inducidos experimentalmente mediante ACTH. En esta experiencia se utilizaron 10 vaquillonas Holando Argentino puros por cruza, de entre 18 y 24 meses de edad, con un peso promedio de 400 kg. Todas fueron sometidas a la sincronización de sus ciclos estrales mediante el protocolo Ovsynch. Los animales se dividieron en dos grupos de 5 animales cada uno; el grupo 1 (control) permaneció sin recibir tratamientos adicionales y mientras que a los animales tratados (grupo 2) se le realizó la inducción experimental de quistes foliculares, mediante la administración de ACTH sintética cada 12 horas por 7 días a partir del día 15 del ciclo estral, siguiendo un protocolo publicado previamente. Se realizó el seguimiento por ecografía de todos los animales corroborando la presencia de quistes foliculares en el grupo experimental. Se extrajeron los ovarios mediante ovariectomía efectuando cortes histológicos sobre los que se realizó una técnica inmunohistoquímica indirecta para la determinación de Bcl-2 y caspasa-3. Se evaluaron las capas de la granulosa y la teca interna de folículos secundarios, terciarios, atrésicos (en los dos grupos) y quísticos (grupo 2). Se determinó mediante análisis digital de imágenes, el porcentaje del área inmunopositiva para cada capa. El análisis estadístico se efectuó mediante un test de ANOVA, seguido por el post-test Duncan. Los resultados se detallan en la tabla 1. Tabla 1. Área marcada por inmunohistoquímica para caspasa-3 y Bcl-2 en distintas estructuras foliculares ováricas de animales con ciclos estrales normales (grupo 1) y con quistes foliculares inducidos experimentalmente (grupo 2). Caspasa-3 Bcl-2 Granulosa Teca interna Granulosa Teca interna Grupo 1 Folículos Secundarios 2,37 +/- 1,08a 3,83 +/- 1,20 a 14,51 +/- 5,14 a 27,42 +/- 6,51 a Folículos Terciarios 3,46 +/- 1,36 6,88 +/- 1,51 a 18,62 +/- 3,39 a 28,30 +/- 7,29 a Folículos Atrésicos 10,06 +/- 2,36b 20,22 +/- 5,33 b 2,01 +/- 1,50 b 6,52 +/- 5,61 b Grupo 2 Folículos Secundarios 2,61 +/- 0,52a 6,21 +/- 1,20 a 12,44 +/- 3,43 ab 11,35 +/- 5,28 ab Folículos Terciarios 4,84 +/- 1,55a 5,34 +/- 1,58 a 17,34 +/- 6,04 a 14,00 +/- 3,12 ab Folículos Atrésicos 14,09 +/- 3,81b 27,14 +/- 5,15 b 5,45 +/- 1,11 b 3,37 +/- 1,61 b Folículos Quísticos 7,017 +/- 2,79a 6,78 +/-2,38 a 20,19 +/- 3,10 a 22,47 +/- 4,66 a Media +/- DEM. Dentro de cada columna letras diferentes indican diferencias significativas (p < 0.05). En conclusión, hemos encontrado que la formación de los quistes foliculares está asociada a una elevada expresión de una proteína crucial para la supervivencia celular tal como es Bcl-2 y a una escasa expresión de Caspasa-3, enzima fundamental para iniciar la cascada de la apoptosis. Esto podría explicar por qué los quistes no regresan y permanecen sin ovular ni atresiarse, lo que formaría parte del proceso de persistencia folicular, base de la cistogénesis.