Expresión del correpresor de la actividad de receptores de estrógeno en folículos ováricos bovinos normales y quísticos

ALFARO N; SALVETTI NR; RODRIGUEZ, MF; PANZANI, CG; AMWEG A; ORTEGA HH

Esperanza, Santa Fe

Congreso; XII Jornadas de Divulgación Técnico Científicas en Ciencias Veterinarias. Facultades de Ciencias Veterinarias – Universidad Nacional de Rosario y Universidad Nacional del Litoral; 2011

El represor de la actividad del receptor de estrógeno (REA: Represor of Estrogen receptor Activity) es una proteína correpresora dependiente de ligando que interacciona específicamente con los receptores de estrógenos (RE) suprimiendo marcadamente su actividad transcripcional, pero no la de los otros receptores de hormonas esteroides y no esteroides. Además, REA compite por los mismos sitios de unión al RE con el coactivador de receptor de esteroides 1 (SRC-1) actuando de este modo de manera anti-coactivador y correpresor. Estudios realizados en ratones Knock Out (KO) para el gen REA mostraron individuos no viables, sin embargo el uso de KO condicionados a ciertos órganos (gen ausente solo en los órganos específicos para su estudio) mostraron que este correpresor también tiene una acción importante en la regulación del REα en los órganos reproductivos de la hembra3. La enfermedad quística ovárica (del inglés: Cystic Ovarian Disease: COD) es uno de los desordenes reproductivos más comunes en vacas lecheras. Numerosos autores han analizado la etiología de la enfermedad considerando un desequilibrio a nivel del eje hipotálamo-hipófisis-gonadal como la hipótesis más aceptada1. Sin embargo, estudios recientes sugieren que la variación en los patrones de expresión de proteínas correguladoras presentes en las células del ovario podría jugar un rol potencial en la disfunción ovárica3. A pesar del avance en  el estudio de estas moléculas en diversas condiciones no hemos encontrado antecedentes sobre su expresión en el ovario bovino con COD. Es por eso que en este trabajo nos propusimos evaluar el patrón de expresión del correpresor REA en las distintas estructuras foliculares de ovarios sanos y con COD. Se utilizaron muestras de ovarios obtenidas en frigorífico. Los ovarios fueron examinados para determinar el diámetro folicular y la presencia o ausencia de cuerpo lúteo activo. De este modo se clasificaron los ovarios como provenientes o no de vacas con COD. Las muestras fueron reducidas e inmediatamente fijadas en formol al 10% durante 8hs, lavándose luego en buffer fosfato salino y procesándose siguiendo protocolos de rutina para efectuar la inclusión en parafina. Luego, se efectuaron cortes seriados, de 4 mm de espesor sobre los que se realizó una técnica inmunohistoquímica indirecta para la determinación de REA. La reacción fue revelada utilizando 3,3' diaminobencidina como cromógeno2. La especificidad del anticuerpo, se analizó por Western Blot en muestras de ovario. Se evaluó la inmunoreacción  en células de granulosa y teca de folículos primarios (FP), secundarios (FS), terciarios (FT) de animales con ciclos estrales normales y con quistes foliculares y folículos quísticos (FQ).Los resultados se detallan en la tabla 1. Se encontró marcación citoplasmática y nuclear con REA  en todos los estratos celulares de las categorías estudiadas. Se observó que en todas las estructuras foliculares analizadas la expresión de REA fue mayor en las células de la granulosa que en las de la teca. En folículos terciarios de vacas sanas el patrón de marcación de REA fue significativamente mayor (p<0.05) con respecto a folículos terciarios de vacas con la enfermedad y a las estructuras quísticas. En teca externa se evidenció similar expresión de REA a lo hallado en teca interna. Por Western Blot se detectó una banda a aproximadamente 37 KDa que se correspondió con el peso molecular de REA. Basados en estos resultados podríamos inferir que las alteraciones en la expresión de REA podrían modificar los mecanismos de regulación de la transcripción en las células foliculares ováricas, participando en la patogenia de esta enfermedad.