Análisis de RILs de Lotus bajo estrés salino: Establecimiento de condiciones de crecimiento discriminantes

MELCHIORRE M., QUERO G.E., RACCA R.W. Y H.R. LASCANO.

Chascomús, Bs As

Taller; IV Taller interdisciplinario: Lotus spp y sus simbiontes.; 2008

INTECH

En el marco del proyecto de la Lotassa de la EU, se estudiará el empleo de marcadores funcionales asociados a la tolerancia a estrés salino en RILs (recombinant inbreed lines) de Lotus.  Para este propósito, se caracterizaron, en base a parámetros de crecimiento, las respuestas de tolerancia a NaCl de un conjunto de RILs obtenidas entre Lotus filicaulis x Lotus japonicus ecotipo Gifu (NS- RILs)  y Lotus japonicus ecotipo Gifu x Lotus burttii (GxLb-RILs). Previo a este análisis se describió la tolerancia diferencial de cada uno de los parentales diploides 0, 75, 100, 125, 150 mM de NaCl, sobre plántulas pregerminadas de 7dias. La salinización se realizó por aclimatación y se establecieron las condiciones de duración de tratamiento, nivel de sal, y parámetros de crecimiento en las cuales las diferencias entre genotipos parentales fueran evidentes y estadísticamente diferenciales. En ausencia de estrés, la longitud de la parte aérea y la velocidad de crecimiento fue mayor en L. filicaulis. Los tratamientos disminuyeron  la longitud de la parte aérea en todos los genotipos, siendo L japonicus Gifu afectada en menor magnitud aunque  muestra en general un fenotipo menos desarrollado.  La incidencia de los tratamientos salinos fue marcadamente evidente a los 13 d desde el inicio y en presencia de  125 mM NaCl tanto la longitud total como la longitud de la parte aérea permitieron discriminar a Lj. Gifu de los otros genotipos ensayados, siendo este dato muy valioso considerando  que éste es el  parental común en ambos grupos de  RILs. Previo al tratamiento salino se evaluaron el porcentaje de germinación la generación de plántulas viables normales en  las NS-RILs (Lotus filicaulis x Lotus japonicus ecotipo Gifu) y GxLb-RILs (Lotus japonicus ecotipo Gifu x Lotus burttii) cultivadas en placas de petri en agar:agua (0.8%) durante cinco días. El 75 % de las NS-RILs mostraron promedios de germinación entre 50-100%, sin embargo el 4% de esas líneas mostró un rango de germinación inferior al  9%. En el  61% de las GxLb-RILs  el promedio de germinación fue entre 50-100 %, y en el 37% de esas líneas el rango de germinación fue entre el 10 -49%. La generación de plántulas viables normales también se analizó por rangos de frecuencia. En NS-RILs el 34% de las líneas produjo más del 50% de plántulas normales mientras que un 54% la generación de plántulas viables se ubico entre el 10-49% de las semillas germinadas. El 62% de las GxLb-RILs  produjo entre 50-100% de sus plántulas normales. Para analizar el efecto de la salinidad en RILs NS y GxLb, las plántulas fueron aclimatadas hasta alcanzar 125 mM NaCl en  hidroponía y a los 13 días desde el inicio de la salinización se evaluaron parámetros de crecimiento. El análisis de la longitud total en  NS-RILs permitió discriminar significativamente dos grupos, el primero comprendió 46 NS-RILs de menor crecimiento y sin diferencias con respecto al parental Lj Gifu y el segundo de mayor crecimiento, abarcó 10 NS-RILs que no difirieron del otro parental L.filicaulis. El conjunto de GxLb-RILs  mostró dos grupos estadísticamente diferentes, el primero abarcó 13 RILs con menor crecimiento y el segundo con 8 RILs que contenía ambos parentales sin diferencias respecto de ellos.