Construcción de un sistema de genética reversa del virus de la fiebre aftosa

GIRALDEZ ADRIAN; LA TORRE; MATTION, NORA

vaquerías, Cordoba

Congreso; XXVII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2007

SAV

Construcción de un sistema de genética reversa del virus de la fiebre aftosa El virus de la fiebre aftosa (VFA) es un Picornavirus que posee un genoma de ARN simple cadena de polaridad positiva de aproximadamente 8.200 bases, que codifica para una poliproteína de 2.332 aminoácidos. El VFA es un agente infeccioso de alta relevancia a nivel mundial por los daños económicos que produce y es por ello que el avance en el conocimiento de este virus es de gran importancia, tanto para el diseño de nuevas vacunas como para la prevención y/o contención de posibles brotes La estrategia general consistió en la amplificación por RT-PCR de la totalidad del genoma de VFA en cuatro segmentos y su posterior ensamblado (excluido el tracto de policitosinas). Como templado se utilizó el ARN del VFA serotipo O1 Campos y para los clonados y subclonados solo se utilizaron sitios de restricción presentes naturalmente en la secuencia del genoma viral. En una primera etapa se ensamblaron por separado las mitades 3’ terminal (nt 3006-8168) y 5’ terminal (nt 1-3006) del genoma viral. A esta última se le agregó el tracto de poliC (20 citosinas) a un segmento acotado de la zona 5’ terminal, y posteriormente se reconstruyó el segmento 5’ terminal incluyendo el tracto de poliC. Finalmente, se ensamblaron las dos mitades para obtener el clon completo (VFA ADNc). La transcripción del VFA ADNc está bajo el promotor T7, y previamente se linealiza con un sitio único de corte para la enzima de restricción EcoRV que agrega solo dos nucleótidos río abajo de la cola de poliA