.“Efecto de la proteína X del Virus Hepatitis B sobre P-GP, MRP1 y BCRP: Potenciales nuevas implicancias en la Hepatitis B crónica, la oncogénesis viral y en el tratamiento del hepatocarcinoma celular

CUESTAS, MARÍA LUJÁN; CASTILLO, AMALIA INÉS; GENTILE, EMILIANO ALBERTO ; DELFINO, CECILIA; OUBIÑA, JOSÉ RAÚL; MATHET, VERÓNICA LIDIA

Buenos Aires

Congreso; XVI Congreso Argentino de Hepatología; 2011

Sociedad Argentina de Gastroenterología

Introducción: El carcinoma hepatocelular (HCC) representa el 4% de los tumores de todo el mundo siendo la quinta causa de cáncer en el hombre. Cerca del 80% de los pacientes con este cáncer se encuentra crónicamente infectado con el virus Hepatitis B (HBV). La proteína X del HBV desempeña un rol principal en la oncogénesis hepática. Las mutantes K130M y V131I exhiben una actividad transactivadora  mayor que la  salvaje, contribuyendo a la hepatocarcinogénesis. Las proteínas ABC son bombas transmembrana activas que transportan sustratos en contra del gradiente de concentración. Su sobreexpresión está asociada a la resistencia a múltiples drogas. Existen evidencias que asocian la sobreexpresión de algunos de estos miembros con la inhibición de la vía intrínseca de la apoptosis y el cáncer. Objetivo: Analizar el efecto de la expresión de las proteínas X salvaje y mutada del HBV sobre los niveles de ARNm y la cuantía de expresión de las proteínas ABC P-gp, MRP1 y BCRP. Materiales y Métodos: Mediante RT-qPCR se evaluó en células HepG2.2.15 establemente transfectadas con un replicón del HBV, y células HeLa y Huh7 transitoriamente transfectadas con plásmidos que codifican la proteína X salvaje o mutada (K130M/V131I) del HBV, la variación en la expresión relativa de los genes que codifican para las proteínas P-gp, MRP1 y BCRP. La detección de la expresión de dichas proteínas se realizó mediante Western blot. Resultados: En las células HeLa se evidenció: 1) una disminución en la expresión del gen mrp1 debido a la expresión de la proteína X salvaje, pero ningún efecto debido a la mutada; 2) un incremento en la expresión del gen bcrp debido a la expresión de la proteína X mutada pero ninguna variación debido a la salvaje (p<0,01). En las células Huh7 se evidenció: 1) un aumento en la expresión del gen mrp1 debido a la expresión de la proteína X mutada, pero no debido a la salvaje; 2) un incremento en la expresión del gen bcrp debido a la expresión de la proteína X salvaje pero no debido a la mutada (p<0,01). No se observó variación estadísticamente significativa en la expresión del gen p-gp por la proteína X salvaje ni por la mutada. Los resultados en el Western blot se correlacionaron con los de RT-qPCR. En todos los casos los resultados fueron comparados con los obtenidos en las células HepG2.2.15. Conclusiones: Al estudiar el efecto de las proteínas X salvaje y mutada sobre los niveles de ARNm correspondientes a los genes bcrp, p-gp, y mrp1 por RT-qPCR, se observó un comportamiento dependiente de la estirpe celular estudiada (hepatocitaria vs epitelial) y de la naturaleza salvaje o mutada de la proteína X. Merece especial consideración la observación de un aumento en los niveles de expresión de los genes mrp1 y bcrp en células Huh7, que ameritan su análisis ex vivo para evaluar las potenciales nuevas implicancias (al menos para mrp1) en la hepatitis B crónica, la oncogénesis hepática y en el tratamiento del HCC, tal como lo sugieren estos estudios in vitro.