Evaluación de infecciones múltiples B/BF en pacientes con doble riesgo de transmisión mediante la aplicación del ensayo de heterodúplex.

C. ESPADA, M. CAROBENE, G. ANDREANI, J.C. AMBROSIONI, D.PUGLIESE, J. BENETUCCI, L.MARTINEZ PERALTA.

Salta, 26-29 de agosto de 2009.

Congreso; II Congreso Nacional de SIDA.; 2009

Sociedad Interdisciplinaria de Sida

Antecedentes: La epidemia del HIV-1 en Argentina se caracteriza por la co-circulación del subtipo B en hombres que tienen sexo con hombres y de las formas recombinantes BF en consumidores de drogas inyectables y heterosexuales. Debido a que existe escasa información acerca de la frecuencia de infecciones múltiples con HIV-1 en poblaciones con doble riesgo de transmisión, el objetivo de este estudio fue aplicar el ensayo de heterodúplex (HDA) en el análisis de infecciones múltiples. Mat y Métodos: Se obtuvieron muestras secuenciales de sangre de 10 pacientes HIV + (P) de Buenos Aires con sus correspondientes consentimientos informados y reportes de parámetros clínicos como recuento de células CD4, carga viral (VL) y tratamiento antirretroviral (ARV). Las regiones genómicas provirales gag y pol se amplificaron por Nested-PCR, y los amplicones fueron utilizados para el ensayo de HDA según Powell et al (2008). Las infecciones múltiples se confirmaron por clonado y secuenciación. El análisis filogenético se realizó mediante Neighbor- joining (MEGA 4) y la detección y análisis de las secuencias recombinantes se evaluó por bootscanning (SIMPLOT). Resultados: Se amplificaron las regiones genómicas gag y pol de 6 de los 10 pacientes reclutados y se observaron heterodúplex en 3 de ellos. El análisis filogenético de gag mostró que en los pacientes P1 y P2, las secuencias de las muestras 1 y 2 se agrupaban con referencias B y F, respectivamente. En ambos casos, se detectó una secuencia recombinante BF. En el P3, las secuencias de ambas muestras se separaron en dos clusters diferentes pertenecientes al subtipo B. El análisis de divergencia genética entre ellos y con respecto a referencias B sugeriría una infección doble intrasubtipo. Sin embargo, en el análisis filogenético de pol, las secuencias de las muestras 1 y 2 de cada paciente se interdigitaron, formando un solo cluster. En los pacientes P1 y P3 no se pudo establecer una relación entre los valores de los parámetros clínicos y la coexistencia de secuencias nucleotídicas diferentes. En contraposición, en el P2, se observó un aumento significativo de la CV debido a que la detección de secuencias diferentes entre las dos muestras coincidió con una interrupción del tratamiento ARV. Conclusiones: La técnica de HDA nos permitió identificar la coexistencia de secuencias diferentes B/BF en esta población, lo cual no estaría influenciada por la implementación del tratamiento ARV. Estos resultados sugieren que las infecciones múltiples podrían ser un factor importante en la evolución viral de los subtipos circulantes en nuestro país.