Resistencia a la apoptosis durante el desarrollo de una infección persistente.

P.N. FERNANDEZ LARROSA, M. VACOTTO, D. RIVA, R. LUZZI, M. SARACCO, S. MERSICH, L. MARTINEZ PERALTA.

Buenos Aires

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología, Buenos Aires, 22-25 de septiembre de 2008.; 2008

Sociedad Argentina de Virología, Asociación Argentina de Microbiología.

A pesar de que la mayoría de la muerte celular asociada a la infección por HIV ocurre en células no infectadas, y en menor medida en células infectadas de forma aguda, puede suceder que algunas células infectadas no mueran por apoptosis después de la infección. La sobrevida de células T, productoras de virus, puede estar favorecida por varias proteínas virales como nef, tat  y vpr, e involucra la regulación de los mecanismos normales de la apoptosis. Las células crónicamente infectadas presentan una importancia crucial en la infección por HIV ya que pueden actuar como reservorios virales, ya sea con una infección productiva o latente. Materiales y métodos: Para analizar el fenotipo de resistencia a la apoptosis, células de la línea H9, de origen linfoide,fueron infectadas de forma aguda con HIV a una multiplicidad de infección de 1 DICT50/célula. Las células fueron cosechadas a distintos días post-infección (p.i.) y tratadas con 10uM de peroxido de hidrógeno (H2O2) o 0,1 uM de Staurosporina (STS) como inductores de apoptosis previamente estandarizados. En paralelo, se realizó un control con medio de cultivo (CTRL). Se analizó el efecto de la infección viral per se sobre la viabilidad celular al igual que la formación de sincicios. Se evaluó la susceptibilidad a la apoptosis como los niveles de apoptosis temprana a las 24 horas post-tratamiento mediante la marcación dual con annexina-V-FITC e ioduro de propidio y analisis en Citometría de flujo. Para el análisis estadístico, se realizó un ANOVA. Resultados: Se observó que las células infectadas mostraban el mismo patrón de viabilidad celular que las células no infectadas hasta el día 4 p.i., cuando se observa la formación de sincicios. A partir de este día, la viabilidad de las células infectadas cae dramáticamente hasta 20%, mientras que las no infectadas se mantienen entre los niveles normales (90-70%). Cuando se analizó la susceptibilidad a la apoptosis, se observó que las células infectadas del dia 2 p.i. y tratadas por 24 horas con los inductores, mostraban menores niveles de apoptosis (H2O2: 38%; STS: 40%, p