Análisis de las modificaciones producidas por la Radiación Ultravioleta germicida en el ADN de Escherichia coli utilizando REP-PCR

TROMBERT, A.R., IRAZOQUI, H., ZALAZAR, F. Y MARTÍN, C.A

San Luis

Congreso; Congreso Argentino de Química; 2006

Asociación Argentina de Química

La radiación ultravioleta (UV) ha sido propuesta como alternativa al uso del cloro en determinadas aplicaciones tales como el tratamiento de aguas residuales, la desinfección de agua destinada al consumo humano (U.S. EPA, 1996), y otras vinculadas a la seguridad microbiológica de alimentos (Guerrero-Beltrán y col., 2004). Los mecanismos por medio de los cuales la radiación UV inactiva los microorganismos dependen de la longitud de onda empleada. El efecto germicida de la radiación  UV de longitud de onda corta (UV-C y UV-B, 220 a 320 nm) es debido fundamentalmente a la absorción directa de la radiación por las bases nitrogenadas del ADN de los microorganismos, lo cual conduce a reacciones de fotocicloadición entre bases adyacentes, que culminan con la formación de diferentes fotoproductos, incluyendo dímeros de pirimidina del tipo ciclobutano cis-syn y trans-syn y aductos del tipo pirimidina (6-4) pirimidona. Dichas alteraciones en la estructura del ADN dificultan su normal replicación, inhibiendo la capacidad proliferativa de los microorganismos. (Jagger, 1985). La determinación del tipo de ?daño? causado por la radiación UV es crucial en aspectos como la capacidad residual del desinfectante y la posibilidad de reactivación microbiana, los cuales afectan directamente la eficacia del proceso.Teniendo esto en cuenta, es factible analizar las alteraciones luego del tratamiento con radiación UV, utilizando estrategias de amplificación de ácidos nucleicos in vitro a través de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), con la idea de que, como producto del tratamiento con radiación UV, se generen patrones de amplificación diferentes en el ADN bacteriano antes y después de dicho proceso (Bruchmuller y col., 2005)Para verificar esta hipótesis, se utiliza una estrategia robusta para el análisis de relaciones moleculares entre bacterias conocida como REP-PCR. En este trabajo, muestras de ADN de E. coli irradiadas con UV son amplificadas por PCR, utilizando secuencias (primers o cebadores) que se unen a regiones conservadas dentro del genoma bacteriano conocidas como Repetitive Extragenic Palindromes (REP). (Woods y col, 1993; Olive y col., 1999)