Caracterización del gen de la RNA replicasa del Virus Junín.

GOÑI, S.E.; GHIRINGHELLI, P.D.; ROMANOWSKI, V.; LOZANO, M.E.

Tandil

Congreso; XXIII Jornada Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2003

Sociedad Argentina de Virología

La familia Arenaviridae está formada por 18 virus y se encuentra subdividida en dos grupos relacionados por propiedades antigénicas y moleculares. Estos grupos se denominan Arenavirus del Viejo Mundo y Arenavirus del Nuevo Mundo. Los arenavirus son virus envueltos en una membrana lipoproteica y poseen un genoma compuesto por dos especies de RNA de cadena simple, de polaridad ambisentido. El RNA menor (denominado S, small), tiene alrededor de 3500 nucleótidos de longitud, mientras que el mayor (denominado L, large) tiene aproximadamente 7000-7500 nucleótidos. Los arenavirus Tacaribe, LCM, Lassa y Pichindé son, hasta el momento, los únicos representantes de la familia cuyo RNA L ha sido totalmente secuenciado. Los principales huéspedes de estos virus son generalmente roedores, que pueden trasmitir la enfermedad a los humanos. En Argentina se han descripto varios arenavirus autóctonos, el virus Junín, agente de la fiebre hemorrágica argentina (FHA), y los virus Oliveros y Pampa. La FHA es una enfermedad aguda con una alta tasa de mortalidad. En el área endémica de FHA se ha venido administrando una vacuna para proteger a la población con mayor riesgo de contraer la enfermedad. La vacuna utilizada, contiene una cepa de virulencia atenuada del virus Junín denominada Candid #1. A pesar de que el fenotipo atenuado de la cepa Candid #1 ha sido ampliamente comprobado por ensayos con animales de laboratorio y por ensayos clínicos con grupos de voluntarios se desconoce la base molecular del proceso de atenuación. Afortunadamente, se dispone de una serie completa de virus con distinto grado de virulencia directamente emparentados con la cepa vacunal y cuya genealogía se encuentra perfectamente documentada. En nuestro laboratorio se ha descripto la secuencia del RNA S de la cepa vacunal y de varias cepas progenitoras de la misma. Las diferencias encontradas no son importantes por lo que es probable que las principales causas de la atenuación de la virulencia estén definidas en el RNA L donde se encuentra el marco de lectura de la enzima que permite la replicación del genoma viral. En este trabajo estamos mostrando, además, un análisis de secuencias parciales del RNA L de distintas cepas del virus Junín. Para ello, se compararon los 4 RNAs L de arenavirus ya descriptos, y se detectaron regiones de alta homología entre los RNAs y entre las secuencias de las proteínas L y Z codificadas en los mismos. A partir de estos análisis, se establecieron criterios de localización de regiones de alto grado de conservación y de diseño de oligonucleótidos generalizados. Utilizando estos oligonucleótidos como ?primers? se amplificaron por PCR fragmentos del RNA L de distintas cepas del virus Junín, los que fueron clonados en plásmidos y secuenciados totalmente. Del análisis de las secuencias obtenidas, es posible sugerir la presencia de algunos marcadores de la atenuación de la virulencia. Se espera que el secuenciamiento de las regiones restantes del RNA L del virus Junín que estamos analizando, revele nuevos sitios que puedan ser asignados a la definición del fenotipo viral. Estos resultados podrán ser confirmados mediante ensayos de mutagénesis dirigida y genética reversa, para los cuales es necesario poseer los marcos de lectura de las proteínas virales clonados en plásmidos recombinantes.