Las vesículas inducidas por la expresión de la proteína Z del Virus Junìn, pueden ser utilizadas como un sistema de vehiculización de antígenos heterólogos

BORIO, C.S.; BILEN, M.F.; ARGÜELLES, M.H.; STEPHAN, B.I.; ISERTE, J.A.; GOÑI, S.E.; GLIKMANN, G.; LOZANO, M.E.

Villa Giardino, Córdoba

Congreso; XXX Reunión Científica Anual de Sociedad Argentina de Virología; 2010

Sociedad Argentina de Virología

Tradicionalmente la producción de vacunas se ha basado en la obtención de cepas virales atenuadas o en la utilización de virus inactivados. Ambas metodologías son relativamente eficientes en la estimulación de la respuesta inmune. Sin embargo, las vacunas a virus atenuados pueden provocar reacciones no deseadas asociadas a la replicación viral, mientras que las vacunas a virus inactivados, pueden producir una baja eficiencia de inmunización o una respuesta inmune con un sesgo diferente al de la infección natural. Por otro lado, se han desarrollado vacunas a subunidad, las cuales presentan un número limitado de antígenos virales. Estas resultan una opción más segura que las anteriores, aunque las proteínas virales en ausencia del contexto de la infección, suelen disminuir su inmunogenicidad. La producción de proteínas virales dentro de las partículas tipo virales (VLPs) ha demostrado ser una metodología segura y eficiente en la vehiculización de antígenos para estimular la respuesta inmune. Estas partículas mimetizan la estructura viral, sin el requerimiento de contener material genético infeccioso, evitando así los riesgos asociados a la replicación viral y superando el problema de la baja eficiencia de las vacunas inactivadas. Se ha descripto previamente que la proteína Z de los arenavirus está implicada en el proceso de brotación viral durante la infección, y hemos mostrado que la expresión de la proteína Z del virus Junín en células de mamífero esta directamente asociada a la brotación de VLPs. En este estudio se propone utilizar esta propiedad para obtener VLPs que contengan en su interior antígenos heterólogos fusionados a la proteína Z, y utilizar las partículas purificadas en ensayos de inmunización en ratones. Para esto, como modelo del sistema, se construyó un vector de expresión en mamíferos conteniendo el gen de la proteína Z fusionado a la proteína fluorescente verde (EGFP) y se analizó su expresión en células 293T por microscopia de fluorescencia y Western Blot. Por otro lado, se evaluó la presencia de VLPs en el sobrenadante del medio de cultivo, mediante Western Blot, citometría de flujo y microscopia electrónica de transmisión (TEM) con anticuerpos conjugados con oro coloidal (immunogold). También se verificó la integridad de las VLPs y la presencia de la proteína Z-EGFP en el interior de la partícula, a través de un ensayo de protección a proteinasa K. Una vez optimizado el sistema de producción de VLPs conteniendo Z-EGFP, se escaló el proceso para obtener cantidades suficientes de partículas para realizar ensayos de inmunización en ratones Balb/c y se evaluó la respuesta inmune generada después del desafío con las VLPs.       Los resultados observados mostraron la estimulación de una respuesta inmune detectable contra el antígeno EGFP, sólo cuando el mismo estaba contenido en el interior de VLPs intactas. De esta forma, es posible plantear un sistema para la vehiculización de diferentes antígenos (péptidos o proteínas) de interés clínico o veterinario.