Aislamiento y caracterización de un bacteriófago específico para Pseudomonas aeruginosa para uso en fagoterapia

ISERTE, J.A.; IGLESIAS, G.; GHIRINGHELLI, P.D.; LOZANO, M.E.

Vaquerías, Córdoba

Congreso; XXIV Jornada Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2004

Sociedad Argentina de Virología

A principio del Siglo XX, los bacteriófagos (fagos) se utilizaron para combatir infecciones bacterianas en humanos(fagoterapia), mostrando resultados alentadores. Sin embargo, debido al desarrollo de los antibióticos los fagos fueron dejados de lado en la medicina occidental. Recientemente, la aparición de bacterias con múltiples resistencias a antibióticos obligó al desarrollo de terapias alternativas y nuevamente la fagoterapia adquirió importancia, particularmente en pacientes fibroquísticos, quienes muestran infecciones pulmonares crónicas letales con bacterias multirresistentes. En este trabajo mostramos el aislamiento y la caracterización de un bacteriófago de Pseudomonas aeruginosa, denominado Wilde-1, que fuera obtenido de aguas servidas generadas en la localidad homónima. Se otimizaron las condiciones experimentales (MOI, composición del medio, agitación, oxigenación, etc.) para de mejorar la capacidad lítica de Wilde-1 en cultivo. Además, se pusieron a punto las condiciones de purificación viral, encontrándose que la estrategia más conveniente fue la centrifugación a alta velocidad en un gradiente de CsCl en presencia de 10mM Mg+2. Mediante tratamiento con nucleasas, análisis electroforético y determinación de la curva de desnaturalización de ácidos nucleicos, se determinó que el genoma de Wilde-1 está formado por una única molécula de DNA lineal de doble cadena. Además, utilizando FIGE se estableció que su tamaño aproximado es de 49,5 kpb. Finalmente, por microscopia electrónica se pudo observar que Wilde-1 posee una cabeza icosaédrica alargada y tiene cola. En consecuencia, Wilde-1 fue clasificado en la familia Siphoviridae del orden Caudovirales. En función de la posible utilización de un fago en terapia antimicrobiana es necesario determinar su rango de huésped. Para ello se infectaron con Wilde-1 13 cepas de P. Aeruginosa, aisladas de pacientes fibroquísticos. De estas cepas sólo cuatro fueron susceptibles. De esta manera, Wilde-1 podría ser útil en fagoterapia únicamente si se lo utilizara en los preparados conteniendo varios bacteriófagos, conocidos como cocktails de fagos.