INVESTIGADORES
LOZANO Mario Enrique
congresos y reuniones científicas
Título:
Generación de vectores baculovirales bicistrónicos para la expresión transitoria en células de mamíferos
Autor/es:
PILLOFF, M.G.; MIELE, S.; BILEN, M.F.; LOZANO, M.E.; GHIRINGHELLI, P.D.
Lugar:
Paseo La Plaza. Buenos Aires
Reunión:
Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología, Asociación Argentina de Microbiología.
Resumen:
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Los baculovirus son una familia
viral que infectan principalmente a lepidopteros. Sus genomas consisten de una
molecula de ADN doble cadena circular con un tamaño de 80 a 180 kpb y son patógenos
específicos con un rango de hospedador muy estrecho. Algunas de sus principales
aplicaciones son el uso como bioinsecticidas, como sistemas de expresión de
proteínas en contextos eucariotas y como vectores de terapia génica o vacunas.
Los sistemas de expresión de
proteínas basados en baculovirus son ampliamente utilizados para la producción
de una gran diversidad de proteínas en células de insecto. Por otra parte, en
la actualidad se está empezando a reconocer su potencial para la transferencia
de genes a células de mamífero por sus características respecto de la
bioseguridad, a la facilidad de su producción y a su bajo costo (según el
método de producción).
Utilizando el sistema Bac-to-Bac,
se generaron 2 vectores de transferencia bicistrónicos que contienen los marcos
de lectura de las proteínas indicadoras LacZ y EYFP separados por un elemento
IRES (sitio de ingreso interno de los ribosomas) del virus de la
encefalomiocarditis, bajo el control de promotores virales de virus de
mamíferos (CMV) o de virus de insectos (IE1).
A partir de estos vectores se
generaron baculovirus recombinantes. Se infectaron células de insecto (Sf9) y
se transdujeron células de mamífero (de primate: Vero E6 y 293-T, células
carcinogénicas murinas: F3II, etc.). En los ensayos se determinó la proporción
de células con actividad de b-galactosidasa,
mediante tinción in situ con X-gal y recuento celular, y en forma
cuantitativa mediante ONPG.
Con estos experimentos se demostró
que los baculovirus recombinantes pueden ingresar y dirigir la expresión de
genes en células de diferentes orígenes y tejidos. Interesantemente, se observó
expresión de los genes indicadores controlados por el promotor baculoviral IE1
en todas las células de mamífero utilizadas. Este resultado demuestra que ambos
casetes de expresión serían aplicables en un alto rango de células de
mamíferos.
Los vectores generados en este
trabajo representan un sistema excelente para la transferencia de genes a
células de mamiferos, lo que los convierte en una herramienta indispensable
para el estudio de la función de los genes. Además, la incapacidad de
replicación de los baculovirus en este tipo de células convierte a los vectores
basados en el genoma de estos virus en una herramienta de posible utilidad en
terapia génica, debido al perfil mejorado de bioseguridad respecto a los
adenovirus y retrovirus, los vectores más ampliamente utilizados para ensayos
de expresión transitoria y generación de líneas establemente transformadas
respectivamente.