INVESTIGADORES
LOZANO Mario Enrique
congresos y reuniones científicas
Título:
Generación de vectores baculovirales bicistrónicos para la expresión transitoria en células de mamíferos
Autor/es:
PILLOFF, M.G.; MIELE, S.; BILEN, M.F.; LOZANO, M.E.; GHIRINGHELLI, P.D.
Lugar:
Paseo La Plaza. Buenos Aires
Reunión:
Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología, Asociación Argentina de Microbiología.
Resumen:
<!-- /* Font Definitions */ @font-face {font-family:Batang; panose-1:2 3 6 0 0 1 1 1 1 1; mso-font-alt:바탕; mso-font-charset:129; mso-generic-font-family:auto; mso-font-format:other; mso-font-pitch:fixed; mso-font-signature:1 151388160 16 0 524288 0;} @font-face {font-family:"Lucida Sans Unicode"; panose-1:2 11 6 2 3 5 4 2 2 4; mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:swiss; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:-2147476737 14699 0 0 63 0;} @font-face {font-family:"\@Batang"; panose-1:0 0 0 0 0 0 0 0 0 0; mso-font-charset:129; mso-generic-font-family:auto; mso-font-format:other; mso-font-pitch:fixed; mso-font-signature:1 151388160 16 0 524288 0;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; mso-hyphenate:none; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:Batang; mso-ansi-language:ES-AR; mso-fareast-language:AR-SA;} p.MsoBodyText3, li.MsoBodyText3, div.MsoBodyText3 {margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; text-align:justify; line-height:15.0pt; mso-pagination:none; mso-hyphenate:none; font-size:10.0pt; font-family:Arial; mso-fareast-font-family:"Lucida Sans Unicode"; mso-font-kerning:.5pt; mso-ansi-language:ES-TRAD; mso-fareast-language:#00FF;} @page Section1 {size:595.25pt 841.85pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1; mso-footnote-position:beneath-text;} --> Los baculovirus son una familia viral que infectan principalmente a lepidopteros. Sus genomas consisten de una molecula de ADN doble cadena circular con un tamaño de 80 a 180 kpb y son patógenos específicos con un rango de hospedador muy estrecho. Algunas de sus principales aplicaciones son el uso como bioinsecticidas, como sistemas de expresión de proteínas en contextos eucariotas y como vectores de terapia génica o vacunas. Los sistemas de expresión de proteínas basados en baculovirus son ampliamente utilizados para la producción de una gran diversidad de proteínas en células de insecto. Por otra parte, en la actualidad se está empezando a reconocer su potencial para la transferencia de genes a células de mamífero por sus características respecto de la bioseguridad, a la facilidad de su producción y a su bajo costo (según el método de producción). Utilizando el sistema Bac-to-Bac, se generaron 2 vectores de transferencia bicistrónicos que contienen los marcos de lectura de las proteínas indicadoras LacZ y EYFP separados por un elemento IRES (sitio de ingreso interno de los ribosomas) del virus de la encefalomiocarditis, bajo el control de promotores virales de virus de mamíferos (CMV) o de virus de insectos (IE1). A partir de estos vectores se generaron baculovirus recombinantes. Se infectaron células de insecto (Sf9) y se transdujeron células de mamífero (de primate: Vero E6 y 293-T, células carcinogénicas murinas: F3II, etc.). En los ensayos se determinó la proporción de células con actividad de b-galactosidasa, mediante tinción in situ con X-gal y recuento celular, y en forma cuantitativa mediante ONPG. Con estos experimentos se demostró que los baculovirus recombinantes pueden ingresar y dirigir la expresión de genes en células de diferentes orígenes y tejidos. Interesantemente, se observó expresión de los genes indicadores controlados por el promotor baculoviral IE1 en todas las células de mamífero utilizadas. Este resultado demuestra que ambos casetes de expresión serían aplicables en un alto rango de células de mamíferos. Los vectores generados en este trabajo representan un sistema excelente para la transferencia de genes a células de mamiferos, lo que los convierte en una herramienta indispensable para el estudio de la función de los genes. Además, la incapacidad de replicación de los baculovirus en este tipo de células convierte a los vectores basados en el genoma de estos virus en una herramienta de posible utilidad en terapia génica, debido al perfil mejorado de bioseguridad respecto a los adenovirus y retrovirus, los vectores más ampliamente utilizados para ensayos de expresión transitoria y generación de líneas establemente transformadas respectivamente.