INVESTIGADORES
LOZANO Mario Enrique
congresos y reuniones científicas
Título:
Desarrollo de un sistema de vehiculización de antígenos heterólogos utilizando la proteína Z del virus Junín
Autor/es:
BORIO, C.S.; BILEN, M.F.; ARGÜELLES, M.H.; GLIKMANN, G.; LOZANO, M.E.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología - Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
La proteína Z de los Arenavirus contiene
tres dominios principales: la región amino terminal, la cual comprende el
dominio de miristoilación; la región central, conteniendo un motivo Zinc finger, y la región carboxilo terminal,
donde se encuentran los dominios tardíos. Estos últimos dominios están
implicados en el proceso de brotación viral y en la formación de partículas
tipo virales (VLPs). Estas partículas mimetizan la estructura viral, sin el
requerimiento de contener material genético infeccioso, evitando así los
riesgos asociados a la replicación viral. En este sentido, estas VLPs podrían
ser utilizadas para diversos fines biotecnológicos. Se ha demostrado que estas
partículas tipo virales podrían ser un sistema seguro y eficiente para la
vehiculización de antígenos específicos.
En este estudio se utilizó la capacidad
de brotación de la proteína Z del virus Junín para obtener VLPs a partir de
cultivos celulares in vitro. Como
sistema modelo se fusionó la proteína fluorescente verde (EGFP) a la proteína Z
para evaluar y caracterizar, in vivo
e in vitro, la capacidad de
vehiculización del sistema propuesto.
Para esto se ensayaron dos sistemas de
expresión: células de mamífero y células de insecto.
Por un lado, se construyeron vectores
de expresión para células de mamíferos y se analizó mediante ensayos
transitorios la producción de VLPs. Posteriormente se las caracterizó
utilizando técnicas de inmunodetección, microscopía electrónica y ensayos de
protección a proteasas. Estas partículas purificadas fueron utilizadas para realizar
ensayos de inmunización en ratones Balb/c y evaluar la respuesta inmune
generada contra el antígeno.
Los resultados observados mostraron la
estimulación de una respuesta inmune detectable contra el antígeno EGFP, sólo
cuando el mismo estaba contenido en el interior de VLPs intactas.
Por otro lado, para evaluar la capacidad
de brotación de esta proteína en células de insecto se generó un baculovirus de
AcMNPV recombinante expresando la proteína Z fusionada a EGFP. Mediante western blot, y microscopía de fluorescencia
se confirmó la expresión de la proteína Z-EGFP tanto en la fracción celular como
en el sobrenadante de cultivo. Para confirmar que las proteínas detectadas
corresponden a VLPs y no a partículas de virus brotantes se realizaron ensayos
en presencia de un inhibidor de la polimerasa viral. Los resultados sugieren la
presencia de VLPs en el sobrenadante de cultivo de células de insecto
infectadas. La utilización del sistema de baculovirus en células de insectos
proporcionaría ventajas técnicas y económicas para la generación de un sistema
de producción de VLPs eficiente.
