Efectos de la fosforilación por PKA del residuo S173 de AMPKalpha1 en la supervvencia durante la falta de glucosa en células derivadas de hepatocarcinoma.

FERRETI AC; TONUCCI FM; HIDALGO F; ALMADA E; OJEDA M; LAROCCA MC; FAVRE C

Mar del Plata

Congreso; Reunion cientifica anual conjunta de SAIC Y SAFIS; 2015

SAIC-SAFIS

Las quinasas AMPK y PKA intervienen en la regulación de laproliferación y la muerte celular en respuesta a señales metabólicasy de crecimiento. Demostramos que la ausencia de glucosaproduce disminución de la viabilidad en células C3A, asociada a lainducción de apoptosis y al arresto del ciclo celular. Por otro lado,esta condición nutricional induce la activación temprana de PKA yAMPK. Detectamos que PKA fosforila y regula negativamente laactivación de AMPK. Existen tres residuos de AMPK fosforilablespor PKA: S485, S497 y S173, la fosforilación del último inhibealostéricamente la activación de AMPK. En este estudio evaluamosla contribución específica de AMPK en la muerte celularproducida por falta de glucosa y analizamos el impacto regulatoriodel residuo S173 en la supervivencia en esta condición nutricional.Se incubaron células C3A con un siRNA para AMPKα1 (O1) o conun siRNA control (SC) en presencia (C) o ausencia de glucosa(Glc0) por 24h seguido de tinción con Anexina V/IP. El silenciamientode AMPK previno la inducción de apoptosis en ausenciade glucosa (Glc0 O1:1,5±0,1* vs Glc0 SC:2,8±0,2; C SC:1).Construimos C3A estables expresando mutaciones de AMPKα1:S173C y S173D y expresando la forma salvaje de AMPKα1(WT). Mediante el ensayo de MTT a distintos tiempos observamosque el aumento de células viables fue considerablementemenor en el clon S173C, tanto en presencia como en ausenciade glucosa (S173C:200,4±25,3%* vs WT:264,8±31,0%; S173CGlc0:145,0±17,5%* vs WT Glc0:179,6±27,1%, 48h). El clon S173Dno mostró cambios significativos en el% de células apoptóticasal quitar glucosa del medio (36h), mientras que en el clon S173Ceste% se duplicó respecto al WT (S173C Glc0:3,1±0,3* vs WTGlc0:1,6±0,1; WT:1). Concluimos que AMPK controla fuertementela supervivencia de las células C3A sujetas a falta de glucosa, y laanulación de la función del residuo S173 de AMPKα1 produce unimportante aumento de la sensibilidad a esta condición. *p