Rol de AKAP350 en el mantenimiento de la progresión del ciclo celular en células hepáticas

MATTALONI SM; FERRETI AC; FAVRE C; LAROCCA MC

Congreso; Reunion cientifica anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2011

AKAP350 (A350) es una proteína de anclaje de kinasa A que nuclea complejos proteicos en centrosomas y aparato de Golgi. En estudios previos reportamos que A350 participa en la diferenciación de las células hepáticas HepG2 en células polarizadas. Nuestro objetivo fue analizar si A350 interviene en la regulación del ciclo celular en estas células. Metodología: Generamos células HepG2 con 60-80% de disminución en la expresión de A350 (A350KD) por RNA de interferencia y con delocalización centrosomal de A350  por transfección con un plásmido que codifica su dominio de localización centrosomal (PACT). Analizamos la distribución de las células en las fases Go/G1, S y G2/M del ciclo celular por citometría de flujo, la morfología centrosomal y nuclear por microscopía confocal y los niveles de ciclinas D1, E y A350 por western blot. Resultados: El ?knock down? de A350 indujo aumento de eventos en G1 (Tabla 1) y en los niveles de ciclina D1 (+37%*) y E (+76%*), sugiriendo entrada en ciclo celular con arresto en G1, mientras que la expresión del PACT indujo disminución de eventos en G1 con aumento en S (Tabla1), disminución de ciclina D1 (-59%*) y E (-58%*), y aumento de células binucleadas y alteraciones en la morfología centrosomal coherente con estos cambios (Tabla 2).  Conclusión: el desplazamiento de A350 centrosomal induce alteraciones centrosomales, generando efectos sobre el ciclo celular diferenciales respecto al ?knock down? de A350. Estos datos apoyan la hipótesis de que, a través de la nucleación selectiva de complejos proteicos en centrosomas y Golgi, A350 participaría en la coordinación de los procesos de diferenciación y progresión del ciclo celular en células hepáticas.   Tabla 1 G0/G1 (%) S (%) G2/M (%) control  44 ± 7 45 ± 8 11 ± 4 A350KD 58 ± 7* 36 ± 8   6 ± 4 control   72 ± 1 18 ± 1 10 ± 1 PACT 64 ± 2* 26 ± 2* 11 ± 1   Tabla 2 Celulas binucleadas (%)  1 centrosoma  2 juntos 2 separados  mas de 2 control 2 ± 1  29 ± 4 58 ± 6 13 ± 3 1 ± 1 PACT 7 ± 2* 9 ± 2* 64 ± 3 19 ± 3 11 ± 4* *p