AKAP350 centrosomal en el establecimiento de la polaridad antero-posterior durante la migración de células HepG2.

TONUCCI FM; FERRETI AC; FAVRE C; LAROCCA MC

Mar del Plata

Congreso; Reunión Anual SAFIS 2013; 2013

SAIC

Introducción. AKAP350 es una proteína de anclaje de PKA que se localiza en el aparato de Golgi (AG) y en los centrosomas, organelas esenciales en la polarización celular durante la adquisición de un fenotipo migratorio (polaridad antero-posterior). Durante el establecimiento de la polaridad migratoria, el AG se reorganiza, orientándose hacia el frente de la herida, proceso que requiere de la integridad centrosomal. Estudios nuestros y de otros grupos demostraron que la localización de AKAP350 tanto en el Golgi como en los centrosomas es necesaria para una migración celular eficiente. Objetivo. Estudiar el mecanismo por el cual AKAP350 centrosomal participa en la migración celular. Metodología. Utilizamos células HepG2 con disminución en la expresión de AKAP350 centrosomal, por expresión estable del dominio de localización centrosomal de AKAP350 fusionado a GFP (AKAP350CTD). Realizamos el análisis cuantitativo de imágenes obtenidas por microscopía confocal de fluorescencia en ensayos de "Wound-Healing" a 6 y 24 h, con el fin de evaluar eficiencia migratoria y polarización del AG, centrosomas y citoesqueleto de actina de las células en el borde de la herida. Resultados: 1. Las células AKAP350CTD mostraron una inhibición en la migración celular a 24 h (-75%*), que no fue evidente a las 6 h; 2. A las 6 h se observó una disminución en el número de células con polarización del AG (-56*) que se mantuvo a las 24 h (-78%*). 3. A las 24 h, las células AKAP350CTD evidenciaron una disminución en el citoesqueleto de actina en el leading edge (-16%*) y en centrosomas polarizados (-40%*). Conclusión: AKAP350 centrosomal participa en el establecimiento de la polaridad antero-posterior durante la migración celular, en un proceso que involucra la reorganización del AG hacia el frente migratorio. * p