PARTICIPACIÓN DE LAS QUINASAS AMPK Y PKA EN LA MODULACIÓN DEL CICLO Y LA MUERTE CELULAR EN CÉLULAS DERIVADAS DE HEPATOCARCINOMA ANTE FALTA DE GLUCOSA

FERRETI AC; TONUCCI FM; HIDALGO F; OJEDA M; LAROCCA MC; FAVRE C

Congreso; LIX Reunión anual de la SAIC; 2014

SAIC

La glucólisis es la principal fuente de energía de las células tumorales, siendo el crecimiento de las mismas altamente dependientes de glucosa. Las quinasas PKA y AMPK intervienen en la regulación de la proliferación celular y la apoptosis en respuesta a distintas señales metabólicas y de crecimiento. Dependiendo de la situación y del tipo celular, ambas pueden tener roles duales. Previamente demostramos que la ausencia de glucosa produce una pérdida progresiva de la viabilidad en células HepG2, asociada a la inducción de muerte apoptótica; y un aumento en los niveles de las proteínas claves en la regulación del ciclo celular, p53 y p21. Por otro lado, también observamos que tanto la activación de PKA como de AMPK inducen muerte apoptótica en dichas células. En el presente estudio evaluamos la interconexión entre estas vías de señalización durante la restricción de glucosa. Células HepG2 se incubaron distintos tiempos en presencia (C) y ausencia de glucosa (Glc0) y se analizó la activación de PKA y AMPK. Ambas quinasas se activaron significativamente a partir de las 2 h de ausencia de glucosa. Estudios citométricos revelaron que luego de 36 h la falta de glucosa ó el activador de AMPK, AICAR, provocaron un aumento en la población de células en la fase G0/G1 del ciclo celular (Glc0: 73,2±2,6%*; AICAR: 66,9±1,4%*; AICAR glc0: 72,2±0,4%* vs C: 55,7±2,7%). Por otro lado, la activación de PKA con dbAMPc previno en más de un 50% el arresto en G0/G1 inducido por AICAR. A la vez, la activación de PKA disminuyó los niveles de AMPK activada (Thr172-P), mientras que la inhibición de PKA potenció la activación de AMPK. Mediante estudios de inmunoprecipitación demostramos que PKA fosforila a AMPK. Nuestros resultados sugieren que, mediante fosforilación directa, PKA es capaz de regular negativamente la activación de AMPK durante la restricción de glucosa en células HepG2. Se discutirán los estudios genéticos con los que tratamos de confirmar este mecanismo. * p