Participación de CIP4 en la adquisición del fenotipo migratorio en células epiteliales

HIDALGO F; TONUCCI F; FERRETI AC; VENA R; FAVRE C; LAROCCA MC

Buenos Aires

Congreso; LIX Reunión anual de la SAIC; 2014

SAIC

Diversas situaciones fisiopatológicas inducen la conversión de la polaridad epitelial en la antero-posterior necesaria para la migración direccionada. Eventos tempranos de esta transición son el movimiento del núcleo hacia el polo posterior de la célula y la orientación de los centrosomas (Ct) y el aparato de Golgi (AG) hacia el polo anterior. AKAP350 es una proteína de andamiaje localizada en AG y Ct. Recientemente describimos que AKAP350 centrosomal participa en la obtención de la polaridad migratoria en células de origen epitelial. AKAP350 interacciona con la proteína efectora de cdc42 CIP4, que integra la rearreglo del citoesqueleto durante la formación de estructuras de membrana polarizadas. El objetivo de este trabajo fue analizar la participación de CIP4 en la adquisición de la polaridad migratoria en células de origen epitelial. Inicialmente, caracterizamos la localización centrosomal de CIP4. Luego, generamos células HepG2 con expresión disminuida de AKAP350 (A350KD), y de CIP4 (C4KD) por RNA de interferencia. Analizamos la obtención de la polaridad migratoria, mediante microscopía confocal de inmunofluorecencia de ensayos de ?wound-healing?. La disminución en la expresión de ambas proteinas indujo una pérdida de la polarización del AG y de los Ct (% GA polarizado: controles(C):72%±10, A350KD:22%±10*, C4KD:11%±5*.% Ct polarizado: C:65%±6, A350KD:28%±5*, C4KD:14%±3*). Utilizando estos ensayos, determinamos la distancia (D) del centroide de los núcleos (N) y de los Ct al frente de migración respecto a la del centroide de la célula. Observamos que el ?knock down? de AKAP350 y de CIP4 indujo una prevención en la relocalización anterior de los centrosomas (D Ct: C:-4±1 A350KD:-18±1,9* C4KD:-24±1,5*), pero no en la posterior de los núcleos (D N: C:-9 ±1 A350KD:-13±1 C4KD:-10±0,6). De este modo, confirmamos el rol de AKAP350 en la obtención del fenotipo migratorio y caracterizamos la participación de su proteína de interacción CIP4, en este proceso. (*p