La asociación de PKA a sus proteínas de anclaje es necesaria para la inducción de eventos que conducen a la apoptosis mitocondrial en hepatocitos deprivados de glucosa.

FERRETTI AC; MATTALONI SM; OCHOA EJ; LAROCCA MC; FAVRE C

Mar del Plata

Congreso; LIV Reunion Cientifica Anual SAIC; 2009

Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas

Previamente demostramos que la falta de glucosa induce apoptosis en hepatocitos y que la activación de esta vía depende de la actividad de PKA y de su interacción con sus proteínas deanclaje. Existen sustratos de PKA que son efectores directos de la apoptosis y cuya fosforilación puede favorecer o prevenir su efecto. La proteína pro-apoptótica Bax es fosforilada por PKA, la cual participaría en su activación y formación del canal liberador de citocromo c. Nuestro objetivo fue dilucidar los eventos que conducen a la apoptosis en hepatocitos deprivados de glucosa y evaluar la participación de PKA en los mismos. Para ello determinamos expresión total y mitocondrial de Bax y liberación de citocromo c al citosol, mediante inmunobloting de las respectivas fracciones celulares, y potencial de membrana mitocondrial, utilizando unfluoróforo específico. Los hepatocitos fueron cultivados 6 h en presencia (C), o en ausencia (G0) de glucosa, con o sin el inhibidor de la interacción de PKA con sus proteínas de anclaje, Ht31. EnG0, la expresión total de Bax (133.9 ± 9.7%*) y la translocación a mitocondria de Bax (136.3 ± 12.2%*) aumentaron significativamente respecto a C (100%, *p<0.05), mientras que Ht31 previno estos efectos (104.4 ± 18.1% y 98.7 ± 20.7%, respectivamente). La falta de glucosa indujo un aumento en la liberación de citocromo c al citosol (G0: 137.9 ± 21.0%* vs C: 100%, *p<0.05), el cual fue prevenido por la presencia de Ht31 (66.6 ± 6.1%). Para evaluar si esteaumento en la translocación de Bax a mitocondria era inducido por la fosforilación directa de Bax por PKA, inmunoprecipitamos Bax y la inmunodetectamos con un anticuerpo específico para sitiosfosforilados por PKA, no observándose la presencia de Bax fosforilada. Estos resultados indican que en la apoptosis inducida por falta de glucosa en hepatocitos, Bax transloca a mitocondria,proceso que requiere la interacción de PKA con sus proteínas de anclaje y en el que Bax no es fosforilada por la misma.