Rol de la proteína de anclaje de PKA AKAP350 en la polarización de células hepáticas

LAROCCA MC; MATTALONI SM; FERRETTI AC

Mar del Plata

Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la SAIC; 2009

SAIC

El establecimiento de la polaridad basolateral/canalicular es un proceso finamente regulado, de importancia para las distintas funciones del hepatocito. La proteína quinasa A (PKA) estimula la biogenesis canalicular por mecanismos no totalmente comprendidos. La proteína de anclaje de PKA AKAP350 ensambla complejos proteicos que modulan la dinámica del citoesqueleto. Nuestro objetivo fue analizar si AKAP350 interviene en la generación y mantenimiento de polaridad en células hepáticas. Metodología: Generamos células HepG2 con 60-80% de disminución en la expresiónde AKAP350 (AKAP350-) utilizando RNA de interferencia, y células HepG2 con delocalización centrosomal de AKAP350 (PACT) mediante transfección con el plásmido que codifica el dominio de localización centrosomal de AKAP350 fusionado a GFP, pEGFP-PACT. La localización de AKAP350, PKA y la proteína canalicular MRP2, y la estructura del citoesqueleto de actina en células HepG2 se analizó por microscopía confocal de inmunofluorescencia. El análisis morfométrico se realizó usando el programa Image J. Resultados: AKAP350 y PKA mostraron colocalización en centrosomas de localización sub-canalicular. Las células hepáticas polarizadas contienen estructuras densas de actina que corresponden a citoesqueleto pericanalicular. Los grupos AKAP350- y PACT presentaron menor proporción de células con estas estructuras que sus respectivos controles (C) (C: 56±4 % vs AKAP 350-: 44±2 %*; C: 50±2 % vs PACT: 29±4 %*, *p<0,05), y disminución en la localización canalicular de MRP2 (AKAP350-: -41 ± 8 %*; PACT: -20 ± 2 %*; *p<0,01). Resultados similares se obtuvieron inhibiendo la formación de filamentos de actina submembrana con citocalasina B. Conclusión: AKAP350 recluta a PKA en un complejo proteico centrosomal de localización sub-canalicular, que interviene en la polarización de células hepáticas. El mecanismo involucrado podría comprender la regulación de la dinámica del citoesqueleto apical de actina por proteinas de este complejo.