Evaluación del rol de la aquaporina-8 en el transporte transepitelial de agua en células hepáticas

ESPELT, MV; SORIA, LR, LAROCCA, MC; MARINELLI, RA

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2008

Los hepatocitos expresan aquaporinas (AQPs) en forma polarizada. Nuestros trabajos previos indican que la expresión de AQP8 en la membrana canalicular de los hepatocitos se correlaciona con la permeabilidad osmótica canalicular y la secreción biliar. Por el contrario, estudios en ratones aqp8 -/- sugieren que AQP8 no tendría relevancia en el transporte de agua canalicular. Sin embargo, hasta el momento no existe un modelo que permita obtener evidencias concluyentes en uno u otro sentido. Nuestro objetivo fue desarrollar una metodología para evaluar el transporte transhepatocitario de agua en un modelo que permita analizar el rol de la AQP8. Metodología y Resultados: Utilizando ARN de interferencia generamos células HepG2 (derivadas de hepatoma humano) con disminución en la expresión de AQP8 (AQP8-), que fue corroborada por inmunobloting (-70%, p<0,05) y microscopía confocal. Células controles y AQP8- fueron pre-cargadas durante 3 min con 5-clorometilfluorescein diacetato, fluoróforo que, luego de ser metabolizado por las células hepáticas, cambia su espectro de emisión de fluorescencia y es rápidamente transportado a las estructuras canaliculares. Estas células fueron expuestas a un gradiente hipo-osmótico de 200 mOsm. La intensidad de fluorescencia fue registrada en áreas de distintos canalículos y la pendiente de decaimiento de fluorescencia relativa fue usada para calcular los cambios relativos en el volumen canalicular (VCR). La disminución en la expresión de AQP8 inhibió significativamente el aumento del VCR en presencia del gradiente osmótico (C: 1,28 ± 0,03; AQP8-: 1,09 ± 0,03, p<0,05). Estos resultados fueron coherentes con resultados obtenidos  en condiciones similares por la técnica tradicional de planimetría, a la vez que mostraron mayor reproducibilidad. Conclusión: desarrollamos una metodología que permitió evaluar el transporte transepitelial de agua en hepatocitos y obtener evidencia definitiva sobre el rol de AQP8 a nivel canalicular.