El knockdown de la expresión de aquaporina-8 inhibe la secreci¨®n canalicular de agua en c¨¦lulas HepG2.

LAROCCA, MC; SORIA, LR; MARINELLI, RA

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La formación de la bilis canalicular depende del transporte osmótico de agua a través del hepatocito. En estudios previos demostramos que aquaporina-8 (AQP8) se expresa en la membrana canalicular de hepatocitos de rata y que sus niveles proteicos se correlacionan con la permeabilidad osmótica al agua de la misma. Sin embargo, no existe evidencia concluyente sobre el rol de AQP8 en la secreción de agua al canalículo. El objetivo de este trabajo fue analizar el efecto de la disminución en la expresión de AQP8 sobre la secreción canalicular de agua en células derivadas de hepatocitos humanos (HepG2). Los estudios de PCR, inmunobloting y microscopía confocal indicaron que AQP8 se expresa en células HepG2, localizándose en vesículas intracelulares y en membrana canalicular. Usando ARN de interferencia generamos células AQP8- con niveles de expresión proteica de AQP8 significativamente disminuidos (-60% a -80%). El análisis morfométrico indicó que las células AQP8- poseen un volumen canalicular disminuido respecto a las controles (C) (C: 113+/-11 um3, AQP8-: 34+/-4 um3; p<0,01). Analizamos los cambios en el volumen canalicular de estas células en condiciones que favorecen el pasaje de agua hacia el canalículo. El análisis de las imágenes obtenidas por microscopía de contraste de fase indicó que la exposición a un gradiente osmótico de -200 mosM provocó un rápido aumento del volumen canalicular en células C (+ 46 %; p<0,01), pero no en las AQP8-. Del mismo modo, la incubación durante 5 min con el agente colerético dibutiril AMP cíclico indujo una expansión canalicular en células C (+31 %; p<0,01), que no se observó en las AQP8-. Estos resultados indican que la expresión de AQP8 es necesaria para el transporte osmótico de agua al canalículo, y son coherentes con la hipótesis que postula que AQP8 media la secreción canalicular de agua, y que, por lo tanto, una disminución en sus niveles proteicos conduce a una secreción biliar defectuosa.