PARTICIPACIÓN DE LA FOSFORILACIÓN DE CIP4 EN LA RESPUESTA CITOTÓXICA EN CÉLULAS NK

HUHN V; PARIANI A; RIVABELLA MAKNIS T; FAVRE C; LAROCCA MC

Jornada; Jornadas de invierno de la Sociedad Argentina de Inmunologia; 2023

La función citolítica de las células NK depende de su interacción con las células blanco a través de una estructura denominada sinapsis inmune (SI) lítica. El síndrome de Wiskott-Aldrich (WAS), originado por el déficit de la proteína WAS (WASp), se asocia a una deficiencia en la respuesta NK-citolítica. WASp es fundamental en la reorganización de F-actina. Su interacción con la “CDC42 interacting protein 4” (CIP4) es central en la regulación de la interacción entre la F-actina y los microtúbulos durante esa respuesta. CIP4 se asocia a los microtúbulos y condiciona la interacción de WASp con el citoesqueleto. Nuestros resultados indican que la activación de las células NK genera una disminución de la asociación de CIP4 con los microtúbulos y que la proteín-quinasa A (PKA) está involucrada en este proceso. Previamente demostramos que CIP4 es fosforilada por PKA en su residuo CIP4(T225). El objetivo general del proyecto es evaluar si la fosforilación de CIP4(T225) por PKA regula la activación de las células NK a través de la modificación de su afinidad por otras proteínas y su asociación al citoesqueleto. Nos planteamos como objetivos específicos evaluar, en células NK, el impacto de la fosforilación de CIP4(T225) en:1. La regulación de la actividad citolítica y la reorganización del citoesqueleto;2. La interacción de CIP4 con los microtúbulos y con proteínas de interés como WASp;3. La asociación de WASp al citoesqueleto.Utilizaremos cultivos ex-vivo de células NK y células NK-YTS controles o con sobreexpresión de CIP4 o de sus mutantes CIP4T225A y CIP4T225E, en reposo o activadas. Se analizará la función citolítica de los distintos grupos celulares mediante citometría de flujo, la maduración de la SI y la asociación de proteínas al citoesqueleto mediante microscopía confocal de inmunofluorescencia, y la asociación de las variantes de CIP4 con WASp y otras proteínas mediante estudios de co-inmunoprecipitación y análisis por western blot o espectrometría de masas.