Efectos neuroprotectores de la Progesterona (PROG) en cultivos organotípicos de Médula Espinal (ME)

LABOMBARDA, FLORENCIA; GONZALEZ, SUSANA; DE NICOLA, ALEJANDRO; SCHUMACHER MICHAEL; GUENNOUN, RACHIDA

Mar del Plata

Congreso; 50 Reunion Anual de la Sociedad de Investigacion Clinica; 2005

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

Numerosos trabajos han demostrado la acción neuroprotectora de la PROG en la ME lesionada. En este trabajo hemos desarrollado un modelo in vitro de trauma en cultivos organotípicos de ME adulta de ratón, a fin de estudiar los mecanismos de neuroprotección del esteroide. La lesión (SCI) se realizó por contusión después de 7 días de cultivo y a un grupo se los incubó una hora antes de la injuria con PROG (10mM) durante 3 días (SCI+PROG). Primeramente se evaluó la muerte celular contando el número de células que incorporaron yoduro de propidio (PI, fluorocromo que se une al ADN) y midiendo actividad LDH (láctico deshidrogenasa) liberada al medio de cultivo. Después de la SCI se produjo un aumento de la actividad LDH (SCI: 164,7 ± 16,52 % vs CTL: 92,31 ± 8,62 %, p<0.05 ANOVA) y un aumento del número de células PI positivas (SCI: 68,75 ± 14,34 vs CTL: 27,33 ± 5,20, p<0.05 ANOVA). El tratamiento con PROG disminuyó tanto la actividad LDH (SCI+PROG: 114,9 ± 24,48 vs SCI, p<0.05 ANOVA) como el número de células PI positivas (SCI+PROG: 22,50 ± 10,44 vs SCI, p<0.01 ANOVA). Luego se estudió el efecto de la PROG y de la SCI sobre la población de motoneuronas, identificadas como células Neu N positivas con diámetro mayor a 5mm en la lámina IX. La SCI disminuyó el número de motoneuronas (CTL: 19,90 ± 4,10 vs SCI: 8,83 ± 1,99, p< 0.01 ANOVA), mientras que la PROG restauró los niveles (SCI+PROG: 22,30 ± 2,48 sv SCI, p<0.001 ANOVA). Se realizaron cultivos con ratones PRKO y observamos que en el 50% de los casos el efecto neuroprotector fue mediado por el PR, mientras que en el 50% restante la neuroprotección se debió a mecanismos alternativos. Por último se evaluó, por RT-PCR, la presencia de los receptores de membrana para PROG (25-Dx, mPR a, mPR b, mPR g) como posibles mediadores de la acción neuroprotectora. Se observó por primera vez que la ME expresa las tres isoformas de mPR sugiriendo que las acciones neuroprotectoras de la PROG en la ME serían mediadas a través de mecanismos mixtos que involucran tanto al PR clásico como a los receptores de membrana.