Estudios sobre la expresión y actividad transformante del gen RSPO3, locus de inserción del virus del tumor mamario murino.

ZIMBERLIN M.N.; GATTELLI A.; RUBINSTEIN N.; COSO O.; KORDON E.

Mar del Plata, Argentina

Congreso; Reunión Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

El virus de tumor de mama murino (MMTV) induce tumores por mutagénesis insercional. En nuestro modelo, tres cepas de MMTV inducen en ratones BALB/c tumores preñez-dependientes que, eventualmente, se independizan de la regulación hormonal. Nuestro grupo ha aislado y clonado 10 sitios de inserción viral en estos tumores. Uno de ellos fue identificado como una inserción localizada en las proximidades del gen Rspo3. En la línea tumoral en la que esta mutación fue hallada encontramos, por técnicas de RT-PCR semicuantitativo, la sobre-expresión de dicho gen. Además, por esta misma técnica hallamos alta expresión de Rspo3 en otras líneas de tumores inducidas por MMTV, en líneas de tumores inducidas por acetato de medroxiprogesterona y en líneas celulares originadas a partir de tumores espontáneos. Para determinar la actividad oncogénica de Rspo3, su cDNA fue clonado primeramente en un vector pGEM-T y luego subclonado en el vector de expresión pCEFL-HA. A continuación se encontró que células NIH-3T3 transfectadas con pCEFL-HA-Rspo3 eran capaces de formar focos de transformación. Estos focos fueron aislados y en estas células, denominadas 3T3-Rspo3 confirmamos la expresión de HA-Rspo3, por análisls de Western blot y RT-PCR, y también determinamos la fosforilación de algunas proteínas quinasas como AKT y JNK. Dado que ha sido reportado que la familia Rspo son proteínas de secreción capaces de inducir fenómenos de proliferación y/o diferenciación en distintos tejidos, decidimos determinar la actividad de medios condicionados por las células 3T3-Rspo3 en células NIH-3T3 ?naif?. Hallamos que estos medios eran capaces de inducir la fosforilación de la proteínasAKT en las células tratadas.  A partir de estos ensayos podemos concluir que Rspo3 es un gen que se expresa con cierta frecuencia en tumores mamarios murinos de distinto origen y que induce fenómenos de transformación celular, los cuales podrían estar mediados por la activación de proteínas quinasas como AKT.