Amaicha del Valle propolis: Isolation of chemical compounds with antimicrobial activity against phytopathogenic bacteria.

ORDOÑEZ R., NIEVA MORENO M.I., VATTUONE M., ISLA M.I.

Tucumán

Jornada; Bio Cell 28(1) 154 (2004-XX Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2004

Asociación de Biología de Tucumán

Introducción: En trabajos previos informamos el efecto de extractos alcohólicos-acuosos de propóleos de Amaicha del Valle, Tucumán sobre bacterias fitopatogénicas Erwinia carotovora, Pseudomonas syringae, Pseudomonas corrugata CECT 124 con valores de concentración mínima inhibitoria (CIM) entre  4.75 a 9.5 µg.ml-1 mientras que X. campestris fue el microorganismo mas resistente con valores de CIM entre 38 a 152 µg.ml-1. Objetivo:  El propósito de este trabajo fue aislar e identificar los compuestos con actividad inhibidora del crecimiento de bacterias Gram negativas patógenas vegetales. Materiales y Métodos: Se prepararon extractos etanólico-acuoso de propóleos de Amaicha del Valle, Tucumán. Se realizó partición entre solventes inmiscibles. Una porción del extracto se particionó con cloruro de metileno. La capa orgánica fue sucesivamente extraida con NaHCO3 al 5%, Na2CO3 al 5% e NaOH al 10%. Las fracciones obtenidas se precipitaron con acetato neutro de plomo. Se realizaron espectros UV-Visible de los extractos totales y de las  fracciones obtenidas, cromatografias  en RPHPTLC utilizando como fase móvil etanol/agua (55:45, v/v), TLC en Sílica gel F-254 utilizando como fase móvil Tolueno/Cloroformo/Acetona (4,5:2,5:3,5). Se visualizaron por UV de onda corta y onda larga y distintos sistemas de revelados. Se evaluó la actividad antimicrobiana de las fracciones y compuestos aislados frente a patógenos vegetales por métodos bioautográficos. Se determinó el contenido de fenoles totales por el método de Folin Ciocalteau y flavonoides totales con AlNO3 /acetato de potasio y con AlCl3 al 2% en etanol. Resultados: Se obtuvieron tres fracciones, una fracción enriquecida en ácidos fenólicos (F1), una de fenoles fuertes (F3) y otra de fenoles débiles (F5). La fracción con mayor contenido en flavonoides es la F5. Se evaluó la actividad antibacteriana de las tres fracciones por métodos bioautográficos  sobre P. syringae y se obtuvo inhibición del crecimiento bacteriano solo en la Fracción F5. A F5 se la trató con acetato neutro de plomo y se comprobó que los compuestos retenidos en el sobrenadante tienen actividad inhibitoria del crecimiento bacteriano.  Las RPHPTLC revelan la presencia de una banda mayoritaria de fluorescencia púrpura en el sobrenadante F5. Las TLC en Sílica gel F-254. Indican la presencia de al menos cuatro bandas en F5 y dos bandas con Rf de 0,70  y  0,77  en el sobrenadante de F5. La banda mayoritaria de Rf 0,77  fue la que presentó actividad inhibitoria del crecimiento de P. syringae. Esta banda es de color amarillo a la luz visible,  púrpura al UV de onda larga, no modifica su color en presencia de NH3 , revela con FeCl 3 al 1% en etanol y AlCl 3 al 5% en metanol . El compuesto eluído de las placas de sílica presentó un espectro de absorción UV- visible característico de flavonoles. Conclusiones: Nuestros resultados indicarían que el compuesto aislado es un flavonol.