DESARROLLO DE UN NUEVO METODO AUTOGRAFICO PARA LA DETECCIÓN RAPIDA DE COMPUESTOS HIDROFILICOS Y LIPOFILICOS CON ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE

ZAMPINI, I CATIANA; MESÓN GANA, M JIMENA; ISLA, M INÉS.

Tucumán

Jornada; XXII Jornadas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2005

Asociación de Biología de Tucumán

Introducción: Se ha sugerido que diversos tipos de compuestos de la dieta reducen los niveles de marcadores de daño oxidativo. Las acciones antioxidantes  se producen inhibiendo la generación de especies de oxigeno reactivas o directamente depurando radicales libres. Diversos ensayos in vitro pueden realizarse para demostrar la eficiencia antioxidante de alimentos, fitoterápicos, entre otros. Objetivo: este trabajo describe el desarrollo de un nuevo método autográfico para la detección de componentes (hidrofílicos/lipofílicos) de mezclas complejas (alimentos, fitoterápicos). Materiales y Métodos: Se sembraron diferentes concentraciones de compuestos antioxidantes hidrofílicos y lipofílicos (ácido ascórbico, b-caroteno, naringenina, quercetina y rutina) y muestras de diferentes extractos vegetales acuosos y alcoholicos (fitocomplejos) en placas de sílica gel (TLC). Los componentes químicos de los diferentes extractos ensayados se separaron por TLC utilizando como sistema de corrida benceno:dioxano:ácido acético (9:2,5:0,4). Las placas se cubrieron con 3 ml de agar blando conteniendo el radical catión ABTS·+ (2,2`-azinobis -3-ethylbenzothiazoline-6 sulfonic acid) generado en presencia de persulfato de potasio. Los resultados obtenidos mediante el método autográfico fueron confirmados mediante métodos espectrofotométricos. Resultados: Se realizó la detección cualitativa de compuestos antioxidantes hidrofílicos y lipofilicos por métodos colorimétricos de reducción del radical ABTS·+  en placas de sílica gel. Se ensayaron dos formas de aplicación del radical ABTS·+, por atrapamiento en agar y por adsorción directa sobre el soporte polimérico (silica gel). La actividad antioxidante se evidenció por la presencia de manchas claras (zonas de reducción de ABTS·+) sobre un fondo azul verdoso en 1 minuto. El color desarrollado es estable durante 4 horas a temperatura ambiente en la oscuridad y durante varios días congelado a -20°C. El ensayo fue altamente reproducible. El límite de detección de los diferentes compuestos ensayados fue del orden de 1x10-1 mg para naringenina y quercetina, 1 mg para rutina y b-caroteno, 2,5 mg para ácido ascórbico, 1,5x10-1 mg de compuestos fenólicos totales para extractos vegetales. Conclusiones: El método descripto es un método cualitativo rápido, sensible y altamente reproducible para el screening de mezclas complejas con propiedades antioxidantes y para el aislamiento bioguiado de metabolitos con actividad antioxidante.