Optimización de las Condiciones de Cultivo de Escherichia coli Recombinante para la Producción de Glicerol Deshidrogenasa

I. PARCERISA; C.V. PIATTONI; A.A. IGLESIAS; A. BECCARIA

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

OPTIMIZACIÓN DE LAS CONDICIONES DE CULTIVO DE Escherichia coli RECOMBINANTE PARA LA PRODUCCIÓN DE GLICEROL DESHIDROGENASA. PARCERISA, IVANA(1); PIATTONI, VANESA(1); IGLESIAS, ALBERTO(1); BECCARIA, ALEJANDRO(1)  (1) Instituto de Agrobiotecnología del Litoral, Universidad Nacional del Litoral-CONICET, Santa Fe  Introducción: actualmente el auge por el empleo de biocombustibles permite disponer de abundantes cantidades de glicerol (Gro), subproducto del proceso de elaboración del biodiesel. Además, está establecido el uso del Gro como fuente de carbono en cultivos de microorganismos productores de proteínas recombinantes (DHA), usada extensamente en la industria cosmética como bronceador artificial. La síntesis de DHA a partir de Gro es catalizada por la enzima glicerol deshidrogenasa (GroDHasa) producida, entre otros microorganismos, por Escherichia coli. Objetivo: El objetivo de este trabajo fue determinar las mejores condiciones de crecimiento y expresión de GroDHasa en una cepa de E. coli recombinante; ensayando distintos medios de cultivo suplementados con Gro y distintas condiciones de inducción e incubación. Materiales y métodos: se empleó la cepa E. coli BL21(DE3) transformada con la construcción plasmídica [pET 221b/EcgldA], que contiene el gen que codifica para la GroDHasa de E. coli. Se evaluó el crecimiento de la cepa recombinante en medios suplementados con Gro (LB’ y A1), cuya base se diseñó considerando la formulación del medio LB, el que se empleó como control. Los cultivos se realizaron a 30 °C y 200 rpm, y fueron inducidos con concentraciones variables de lactosa (0-20 g/L) al alcanzar una DO (600 nm) de 0,6-0,8. Luego de la inducción, se evaluaron diferentes temperaturas (20, 30 y 37 °C) y tiempos de cosecha (2, 4, 6 y 19 h). Como controles se realizaron cultivos inducidos con IPTG. Las células obtenidas se resuspendieron y sonicaron. La proteína recombinante se recuperó con alto grado de pureza a partir del sobrenadante libre de restos celulares, por choque térmico (10 min a 60 °C). Se cuantificaron las proteínas totales obtenidas por el método de Bradford y la enzima expresada mediante densitometría en SDS-PAGE, empleando una curva patrón de albúmina sérica bovina.