Inmunohistoquímica y citogenética de un linfoma difuso de células B canino,

CALIRI M; D. FERRÉ; PEDROSA A; GORLA NBM

Jornada; , Jornadas Internacionales de Veterinaria, Provincia de Buenos Aires, 2022.; 2022

INTRODUCCIÓNEl linfoma canino abarca un grupo heterogéneo de enfermedades que se originan como consecuencia de la transformación de células linfocitarias. La clasificación actual se cimenta en la propuesta para el linfoma humano por la Clasificación Europea Americana de Neoplasias Linfoideas y la Organización Mundial de la Salud (REAL-WHO) y comprende más de 20 subtipos de tumores linfoides, cada uno de los cuales representa una entidad bien caracterizada (Valli et al., 2011, 2013). La identificación de cada subtipo se basa en las características clínicas de la enfermedad y en las propiedades del tejido neoplásico: el patrón de crecimiento, tamaño del núcleo, la morfología nuclear, el número de mitosis por campo (400x) y el inmunofenotipo. Además, las alteraciones citogenéticas que contribuyen a la inestabilidad genómica y por ende a la transformación maligna de las células, son características de determinados fenotipos celulares, como por ejemplo las ganancias en el cromosoma 13 (CFA 13) en linfomas de células B (Thomas, et al. 2003). La gran variabilidad entre los diferentes tipos de linfoma puede evidenciarse por la forma en la respuesta al tratamiento y la supervivencia del animal. El linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), es el subtipo más común en caninos al igual que en humanos, representa el 60-70% en el total de los casos de la especie. El objetivo de este trabajo fue describir un caso de linfoma canino en base a la clasificación de la REAL-WHO y describir las características citogenéticas.MATERIALES Y MÉTODOSCanino hembra, mestizo, 10 años de edad, con linfoadenomegalia generalizada de un mes previo a la consulta. El diagnóstico inicial de linfoma se obtuvo mediante citología por PAAF (punción aspiración con aguja fina).Previo al comienzo del tratamiento quimioterápico se obtuvo muestra de sangre periférica con heparina. Se llevó a cabo la técnica de citogenética convencional por un lado de linfocitos de sangre periférica y por otro de tejido de linfonódulo, en la que se cultivaron en medio rpmi 1640 a 37°C y posterior bandeo GTG. Se analizaron 20 metafases con recuento cromosómico y se armó el cariotipo de cuatro de ellas. Luego de dos meses de comenzado el tratamiento, debido al desmejoramiento de la paciente se decide la eutanasia. Post-mortem se obtiene muestra de linfonódulo poplíteo en formol 4% sobre el que se realiza la técnica histológica estándar para estudios de histopatología e inmunohistoquímica. Los criterios histopatológicos que se evaluaron fueron: cápsula, corteza y médula del linfonódulo, características de los linfocitos, núcleo (tamaño y forma, cantidad y ubicación de nucléolos), citoplasma, presencia de macrófagos y células plasmáticas. Los anticuerpos usados para obtener el inmunofenotipo son los anticuerpos anti-CD20 y anti-CD3. RESULTADOSEn el análisis citológico se observó un proceso linfoproliferativo, con población heterogénea de linfocitos de tamaño intermedio a grande, con diagnóstico presuntivo de linfoma. Este resultado fue confirmado mediante histopatología en el que se observó engrosamiento e infiltración de la cápsula del ganglio. Tanto en corteza como en médula se observa un patrón difuso de distribución de linfocitos neoplásicos, con características celulares particulares: predominio de células grandes (núcleos >2 el tamaño de un glóbulo rojo) redondeados e irregulares; la mayoría de las células presentaron un predominio de múltiples nucléolos situados en la periferia nuclear. Citoplasma abundante. Índice mitótico bajo=0-5 mitosis por campo. Contornos celulares irregulares. Escasa presencia de macrófagos y células plasmáticas. La lectura inmunohistoquímica fue positiva para el marcador de membrana CD20 de células B. El diagnóstico histopatológico e inmunofenotípico fue indicativo de DLBCL centroblástico. En cuanto al análisis citogenético, el número modal de las metafases analizadas fue 78, XX, excepto en 3 de ellas que tenían un número cromosómico 79, XX. Se observaron 4 roturas de cromátida y un gap de cromátida en los cariotipos analizados.DISCUSIÓNEl DLBCL representa el subtipo más común tanto en caninos como en humanos (Seelig, et al. 2016). En la mayoría de los casos el hallazgo clínico más frecuente es el agrandamiento de los linfonódulos. Existe una gran variabilidad dentro del los DLBCL en cuanto a la morfología histológica y el índice mitótico que tiene una alta correlación con la supervivencia del animal, con un número de mitosis por campo bajo se reporta una media de supervivencia de alrededor de 180 días (Aresu, 2016), en este caso fue de 120 días. Las alteraciones citogenéticas aleatorias, contribuyen a la inestabilidad genómica. La identificación del cromosoma extra no fue posible por citogenética convencional. Las características citogenéticas son útiles como predictores pronósticos y en combinación con citogenética molecular permiten implementar terapias dirigidas. El linfoma canino no es una enfermedad única en sí misma, sino que comprende una entidad con una gran variedad de presentaciones neoplásicas con características morfológicas, comportamiento biológico, inmunofenotípicas y genéticas diversas. La evaluación propuesta por la REAL WHO, abre el panorama al establecimiento de diagnósticos más certeros y a la posibilidad de tratamientos más específicos.CONCLUSIONESEl canino en estudio tuvo un diagnóstico preciso de DLBCL centroblástico. La clasificación acorde a la REAL-WHO fue posible en base a las características clínicas, histológicas e inmunofenotípicas. BIBLIOGRAFÍAARESU, L.. Canine lymphoma, more than a morphological diagnosis: what we have learned about diffuse large B-cell lymphoma. "Frontiers in Veterinary Science", 2016. 3, Págs. 77.SEELIG, D. M., AVERY, A. C., EHRHART, E. J., LINDEN, M. A. The comparative diagnostic features of canine and human lymphoma. "Veterinary sciences". 2016. 3(2), Págs. 11.THOMAS, R., SMITH, K. C., OSTRANDER, E. A., GALIBERT, F., BREEN, M. Chromosome aberrations in canine multicentric lymphomas detected with comparative genomic hybridisation and a panel of single locus probes. "British journal of cancer". 2003. 89(8), Págs.1530-1537.VALLI, V. E., MYINT, M. S., BARTHEL, A., BIENZLE, D., CASWELL, J., COLBATZKY, F., ... VERNAU, W. Classification of canine malignant lymphomas according to the World Health Organization criteria. Veterinary pathology. 2011. 48(1), Págs. 198-211.VALLI, V. E., KASS, P. H., MYINT, M. S., SCOTT, F. Canine lymphomas: association of classification type, disease stage, tumor subtype, mitotic rate, and treatment with survival. "Veterinary pathology". 2013. 50, Págs. 738-748.