INVESTIGADORES
GONZALEZ LEBRERO Rodolfo Martin
congresos y reuniones científicas
Título:
Modulación alostérica de la actividad ATPasa de la NS3 del virus del dengue ejercida por polirribonucleótidos
Autor/es:
JJ INCICCO; RODOLFO M GONZÁLEZ LEBRERO; LG GEBHARD; AV GAMARNIK; SB. KAUFMAN
Reunión:
Congreso; XL reunión anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
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La proteína no estructural NS3 del
virus del dengue es una helicasa que, como tal, posee la capacidad de
acoplar la hidrólisis de nucleósidos trifosfato al desdoblamiento
de hebras dobles de ARN.
En el presente trabajo estudiamos el
efecto que ejercen los homopolirribonucleótidos poliA (pA) y poliC
(pC) sobre la actividad ATPasa de la NS3 del virus del dengue en
condiciones de estado estacionario. Para ello medimos la velocidad
inicial de hidrólisis de ATP siguiendo la cantidad de fosfato
liberado como función del tiempo en medios de reacción de pH 6.5 y
a 25ºC, variando tanto las concentraciones de ATP como las de pA y
pC.
Observamos que ambos polinucleótidos
incrementan la actividad ATPasa a altas concentraciones de ATP,
mientras que actúan como inhibidores a bajas concentraciones de
sustrato. A todas las concentraciones de polinucleótido ensayadas
las curvas de sustrato presentaron cinéticas hiperbólicas en tanto
que la dependencia de dicha actividad respecto de la concentración
de polinucleótido fue descripta por funciones no monótonas.
En este trabajo proponemos un modelo
cinético mínimo que explica los resultados obtenidos. Analizamos
por qué la aplicación del modelo clásico de activador hiperbólico
es inapropiado en este caso y probamos que el incremento de la
concentración de polielectrolito no es la causa esta inadecuación.
Conclusiones: la unión del
polinucleótido a la NS3 disminuye su afinidad por el ATP; postulamos
que cada molécula de NS3 se une al polinucleótido ocupando 11 bases
del mismo y que, una vez unida, requiere bases libres contiguas por
delante para unir e hidrolizar ATP eficientemente.