Uso de tripanosomas no patogenos para la produccion de proteínas recombinantes de Trypanosoma cruzi

POTENZA, MARIANA; RODRIGUEZ DURAN, JJ; GOMEZ, KARINA A; TELLEZ IÑON, MT

Chaco, Resistencia

Congreso; XXX Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Protozoologia; 2018

Sociedad Argentina de Protozoologia

El estudio de la biología de Trypanosoma cruzi incluye a menudo la caracterización funcional de una proteína en particular o de procesos celulares que involucran múltiples componentes. Estos estudios pueden requerir de las proteínas de estudio en su forma recombinante, para la realización de experimentos específicos. Cuando la metodología de estudio implica determinaciones de actividad biológica, es deseable que las proteínas recombinantes se dispongan en alto grado de pureza y correctamente plegadas. La obtención de este material puede ser un cuello de botella importante cuando los sistemas de expresión más ampliamente utilizados, como Escherichia coli, no satisfacen estas necesidades. Las diferencias intrínsecas de expresión y procesamiento proteico de las bacterias respecto a los tripanosomas pueden resultar en bajos rendimientos de producción o de actividad biológica. Una estrategia válida para superar este problema es optar por sistemas de expresión que ofrezcan un abanico más amplio de modificaciones post-traduccionales. Estas alternativas son sistemas de expresión eucariota que utilizan plantas, levaduras, células de insecto o de mamífero como hospedador. Cuando se utilizan por primera vez en el laboratorio, estos sistemas (excluyendo a las levaduras) requieren de entrenamiento, puesta a punto y adquisición de infraestructura a distintos niveles. En algunos casos, los costos de producción resultan elevados, como ocurre con las células de insecto o mamífero, que requieren el uso de sueros fetales para su cultivo. En esta exposición presentaremos la experiencia adquirida en el uso de un sistema comercial para la expresión de proteínas recombinantes de T. cruzi en el parásito no patógeno Leishmania tarentolae (Sistema LEXSY➤). L. tarentolae alcanza altas densidades de biomasa sin la adición de suero como suplemento de cultivo y su manejo es similar al de otros tripanosomatidos. Su maquinaria de expresión y procesamiento proteicos, similares a T. cruzi en relación a otros eucariotas, favorece la obtención de proteínas recombinantes activas. En nuestro laboratorio adaptamos el sistema de expresión LEXSY para su utilización en cualquier laboratorio que se encuentre familiarizado con el cultivo y manejo de T. cruzi, sin necesidad de adquirir nuevo equipamiento.