Efecto diferencial de los anticuerpos recombinantes anti-proteínas ribosomales P de T. cruzi C5 y B7 sobre células cardiacas

LM TASSO; A BENATAR; G LEVY; KA GOMEZ

Buenos Aires

Congreso; IX Congreso Argentino de Protozología y Enfermedades Parasitarias; 2011

Sociedad Argentina de Protozoologia

La Cardiopatía chagásica crónica (CChC) se caracteriza por presentar altos niveles de anticuerpos (Acs) dirigidos contra proteínas del parásito Trypanosoma cruzi, entre las cuales se destacan las proteínas ribosomales P por compartir similitud con el segundo rulo extracelular de los receptores cardíacos beta1-adrenérgico (beta1-AR) y muscarínico tipo 2. En trabajos previos, hemos demostrado que los Acs de pacientes con CCCh así como un Ac monoclonal (AcM) contra el extremo C-terminal de la proteina ribosomal TcP2beta, llamado AcM 17.2, y sus variantes recombinantes de cadena única del Fv (scFv) C5 y B7, son capaces de reconocer un epítope en el segundo rulo extracelular del beta1-AR e inducir una respuesta funcional en cardiomiocitos. El objetivo de este trabajo fue estudiar si los scFvs C5 y B7 inducen cambios en la sobrevida de los cardiocitos, tal como se demostró previamente con el AcM 17.2. Para ello, se incubaron cardiomiocitos murinos de la línea HL-1 con ambos scFvs, y se determinó apoptosis mediante ensayo de AnexinaV/Ioduro de Propipio por citometría de flujo, y ensayo de Tunel por microscopia de fluorescencia. Los resultados mostraron un aumento significativo del porcentaje de apoptosis en las células tratadas con el scFv C5, comparado con el control, tanto por AnexinaV/Ioduro de Propidio (23.1 ± 1.23% vs 15.57 ± 0.85%; p< 0.002) como por Tunel (32.27 ± 7.061% vs 2.78 ± 2.777%; p< 0.001). Por el contrario, el scFv B7 no sólo no provocó ningún efecto sobre las células cardiacas, sino que inhibió el efecto apoptótico inducido por el scFv C5. A pesar que ambos scFvs se unen al receptor beta1-AR, el efecto diferencial podría deberse al hecho que el scFv C5 se comporta como dímero e induce la dimerización del receptor necesaria para su activación, mientras que el scFv B7 actúa como monómero y por lo tanto, como antagonista de dicho receptor. Asimismo, para estudiar las vías involucradas en el proceso de apoptosis determinamos por la técnica de Western Blot, un aumento del fragmento clivado de la proteína Poly(ADP-ribosa) polimerasa-1 (PARP-1), el cual se origina por la acción proteolítica de las caspasas activadas. Estos resultados indicarían la participación de las caspasas como efectores finales en la inducción de apoptosis por el scFv C5. El estudio de los procesos de apoptosis y sus vías involucradas pretenden contribuir a dilucidar los mecanismos moleculares implicados en la patogenia de la CChC, lo que podría constituir la base del desarrollo de alternativas terapéuticas específicas que permitan mejorar la calidad de vida y expectativa de sobrevida de estos pacientes.