Rol de moléculas superficiales en las interacciones celulares de Ensifer meliloti.

BOGINO, P., SORROCHE F., NIEVAS, F., ZORREGUIETA, A., GIORDANO W.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; III Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental; 2015

Las moléculas superficiales bacterianas son cruciales en procesos de adhesión y colonización de superficies, como así también en procesos de interacción con organismos superiores tales como para el establecimiento de la simbiosis rizobio leguminosa.El objetivo del presente trabajo fue evaluar el rol del LPS y del EPS tipo II de Ensifer meliloti en procesos de interacción célula-célula, célula-soporte y célula-raíces de alfalfa. Se utilizó la cepa silvestre de E. meliloti Rm8530 y cepas mutantes en LPS y EPS II (Rm8530 lpsB, Rm8530 expA y Rm8530 expA lpsB). Se evaluó capacidad para formar biofilm sobre soporte de poliestireno mediante tinción con cristal violeta. La morfología del biofilm fue evaluada pormicroscopía confocal láser en las variantes fluorescentes de las cepas Rm8530 y Rm8530 lpsB. Las interacciones celulares fueron determinadas por microscopía de fluorescencia y microscopía de fuerza atómica. El porcentaje de autoagregación se obtuvo mediante relación de las DO iniciales y finales de cultivos en fase exponencial tardía después de incubarlos durante 24 hs a 4°C. Los ensayos de adhesión a raíces de alfalfa fueron realizados por incubación de suspensionesbacterianas con las raíces, recuentos y cálculos del porcentaje de adhesión. La movilidad por swimming fue realizada en medio TY reducido conteniendo 0,3% de agar. La cepa deficiente en la síntesis de EPS II fue incapaz de formar biofilm, mientras que la mutante defectiva en el LPS conservó esta capacidad aunque de manera reducida comparada a la cepa silvestre, marcando la dependencia de la presencia de EPS II para la formación de biofilm en cepas de E. meliloti. La estructura del biofilm de Rm8530 estuvo organizada en arreglos celularesdefinidos por interacciones laterales de células, mientras que dichas estructuras no se conservaron para la cepa Rm8530 lpsB en cuyo caso estas interacciones fueron de tipo polares, indicando que esta mutación altera el modo a través del cual ocurren las interacciones célula-célula en E. meliloti.Fue determinado un elevado porcentaje de autoagregación de la cepa silvestre y de la mutante en LPS, un porcentaje intermedio de la doble mutante y un reducido porcentaje de la mutante en EPS, indicando que posiblemente el LPS mutado conserva propiedades adhesivas, las cuales serían estabilizadas en presencia de EPS II. La capacidad de adsorción a raíces de alfalfa estuvo incrementada en las cepas mutantes en LPS, mientras que los ensayos de swimming revelaron quetales cepas mostraron una reducción de la movilidad. La mutación en el gen lpsB conduciría a la síntesis de un LPS defectivo, permitiendo que la bacteria mutante posea diferentes arreglos de interacciones celulares y mayor capacidad de adhesión tanto sobre superficies abióticas como bióticas. En cualquier contexto (LPS intacto o defectivo), EPS II sería un factor clave para el desarrollo de los procesos de formación de biofilm y autoagregación deE. meliloti.