Caracterización de fitotoxinas producidas por cepas de Pseudomonas syringae aisladas de soja

CAREZZANO, M.E., OLIVA, M.M., REINOSO, E., PRIMO, E., GIORDANO, W., DEMO, M.S., MARIOLI, J.M.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; III Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental.; 2015

Pseudomonas syringaees es una especie fitopatógena que ocasiona daño en diferentes cultivos; se han aislado de soja los patovares glycinea, tabaci y syringae que producen manchas foliares y marchitamientos en la planta. Diversos factores de virulencia (toxinas) aumentan la severidad de la enfermedad y lesionanlas células de la planta. Las fitotoxinas como la coronatina (cor), faseolotoxina y tabtoxina (tab) inducen clorosis y la siringomicina (sir) y siringopeptina, necrosis. La tab es producida por P. syringae pv tabaci, pv coronafaciens, pv garcae, pv aureofaciens, pv phaseolicola y pv syringae. Cor está descripta en patovares atropurpurea, glycinea, macuolicola, morsprunorum y tomato y sir en pvsyringae. El objetivo fue caracterizar fenotípica y genotípicamente fitotoxinas producidas por cepas de P. syringae aisladas de soja. A partir de plantas con síntomas de tizón fueron aisladas cepas de P. syringae (C13, EM1, LS3, Q, VT2) y se utilizaron cepas de referencia (P.syringaepv. tomato DC 3000, pv. glycinea B076, pv. glycinea RACE 4, pv. syringae P61 y P. syringae Ps5). Detección de toxinas. Tab: Sobre placas con agar MM se sembró un cultivo de E. coli y por técnica de pozo se evaluó la inhibición de la bacteria por la toxina de P. syringae. Se utilizó PCR con los primer tblA1 y tblA2. Cor: Se detectó hipertrofia de tejidos inoculando discos de papa con sobrenadantes de P. syringae. La detección del gen cfl por PCR fue llevada a cabo utilizando el Primer 1 y el Primer 2. Sir: Se pulverizaron esporas de Geotrichumcitri aurantii sobre gotas de cultivos de P. syringaeen placas con medio SRM, incubándolas hasta observar halos de inhibición fúngica ocasionados por la toxina. La reacción de PCR fue llevada a cabo utilizando los pares de primers B (B1 y B2) y D (D1 y D2). Se observó la producción fenotípica de tab em todas las cepas de P. syringae aisladas de soja. Un fragmento de aproximadamente 829 pb, correspondiente al gen tblA, fue amplificado por la cepa de referencia P. syringae Ps5 (fenotípicamente positiva), mientras que no fue detectado en las demás cepas aisladas. Se observó la producción de cor en P. syringae LS3, Q y VT2. Por PCR se amplificó un fragmento de aproximadamente 650 pb en las cepas aisladas C13, LS3 y Q. Fenotípicamente se detectó la producción de sir en las P. syringae C13, EM1, LS3, Q y VT2. Por PCR no se observó la amplificación de fragmentos en estas cepas; en el control positivo, P.syringae pv syringae B728a se detectaron ambos productos de reacción (syrB:752bp y syrD:446bp). De acuerdo a los resultados fenotípicos observados, todas las cepas aisladas de soja produjeron tab y sir y tres produjeron cor, con detección genotípica en dos de ellas. Se observó que la producción fenotípica de las fitotoxinas no siempre se correlacionó con la detección genotípica.En conclusión, para la caracterización de cepas de la especie P. syringae y sus patovares, resulta de utilidad la combinación de ensayos fenotípicos y genotípicos.