Inducción de la via mitocondrial de Apoptosis asociada a la disminución de NHE1 en nefropatia obstructiva neonatal. Efecto de Losartan

BOCANEGRA VICTORIA; MANUCHA WALTER; VICENTI AMANDA; FORNÉS MIGUEL; GARRAMUÑO VALLÉS PATRICIA

Buenos Aires Argentina

Congreso; VIIII Congreso de la Asociación Latinoamericana de Nefrología Pediátrica; 2008

Asociación Latinoamericana de Nefrología Pediátrica

Inducción de la vía mitocondrial de apoptosis asociada a la disminución de NHE1 en nefropatía obstructiva neonatal. Efecto de LosartanBocanegra V, Manucha W, Vincenti A, Fornes M, Vallés P.Facultad de Medicina. UNCuyo. CONICET.Mendoza.ArgentinaIntroducción: El Sistema Renina Angiotensina (RAS), activado durante el desarrollo renal, es necesario para una adecuada nefrogénesis. No obstante, RAS juega un rol significativo en la progresión de la injuria renal por obstrucción ureteral unilateral (UUO) conduciendo a un defecto en el desarrollo y crecimiento renal con reducción de la proliferación celular e incremento de apoptosis, esta última involucrada en la génesis de la atrofia tubular. La injuria mecánica por obstrucción, estímulo de inducción de apoptosis, incluye incremento de presión intraluminal y consecuente dilatación de la luz tubular y deformación celular, en especial en segmentos de nefrón distal. La activación de NHE1 es de vital importancia para la regulación del volumen celular.Objetivos: Evaluar la participación de NHE1 en la regulación de la respuesta apoptótica enUUO neonatal y la probable modificación inducida por la inhibición de receptores AT1 y AT2de Angiotensina II .Materiales y métodos: Ratas neonatas de 48 hs de vida fueron sometidas a obstrucción ureteral unilateral u operación simulada por el período de 14 días. Los animales recibieron losartan 10mg /kg/d (inhibidor AT1), PD-123319 (inhibidor AT2) o vehículo durante 14 días. Se determinó apoptosis mediante TUNEL y microscopía electrónica. Se cuantificaron los niveles de proteína de NHE1 y NHE3, Bax, Bcl2, Procaspasa3 y Caspasa3 por Western Blot. Se evaluó la actividad de Caspasa 3.Resultados: La cuantificación de células apoptóticas (células/mm2) mostró marcado incremento en células epiteliales de túbulos colectores corticales (CCD) luego de 14 días de obstrucción respecto al control: 23±1.22 vs 5.5± 0.48 (p<0.001). Persistencia de apoptosis en células CCD de riñón obstruido+losartan fue demostrado: 23±1.22 vs 20±0.81. Estos resultados fueron corroboraron mediante microscopía electrónica.PD-123319 no mostró cambios significativos. Descenso en los niveles de proteína de NHE1 en membrana de corteza renal obstruida con vehículo vs corteza control: 33.4±6.81,n:4 p<0.001 fue mostrado. La inhibición de NHE1 por dosis crecientes de EIPA indujo apoptosis de células epiteliales y actividad de caspasah3 incrementada confirmando la participación del intercambiador.Luego de administración de Losartan, persistencia de niveles descendidos de NHE1 en UUO fue demostrada: 27±6.71 vs 33.4±6.81, n:4.La abundancia de NHE3 no mostró diferencias significativas entre grupos. El incremento en el ratio Bax/Bcl2, asociado a una disminución en la expresión de procaspasa 3 y aumento de la expresión y actividad de caspasa3; permitió demostrar la activación de la vía mitocondrial de apoptosis en corteza obstruida de animales con y sin administración de losartan.Conclusión: Nuestros resultados demuestran que la ausencia de reversión del proceso de apoptosis por vía mitocondrial, luego de la administración de Losartan, incluye descenso de la expresión de NHE1 en UUO neonatal. Sugerimos evitar la inhibición farmacológica del receptor AT1 de Angiotensina II en nefropatía obstructiva neonatal temprana