INVESTIGADORES
GARCIA Maria Laura
congresos y reuniones científicas
Título:
Naranjo Dulce Transgénico: búsqueda de resistencia al virus de la Psorosis de los cítricos mediada por proteína.
Autor/es:
MARÍA C. ZANEK, CARINA A. REYES, EDUARDO J. PEÑA, MARÍA I. PLATA, NORMA COSTA, OSCAR GRAU, Y MARÍA L. GARCÍA
Lugar:
BUENOS AIRES
Reunión:
Congreso; REDBIO, 2005, Congreso Internacional, BAIRESBIOTEC2005.; 2005
Resumen:
Psorosis es una grave enfermedad que afecta cítricos en
Argentina y Uruguay, se disemina por medio de un vector desconocido causando
considerables pérdidas económicas. Ninguna especie cítrica conocida es
tolerante a esta enfermedad. El agente causal, Citrus psorosis
virus (CPsV), miembro tipo del género Ophiovirus , es multipartito y
su genoma consta de al menos tres RNAs de polaridad negativa. El RNA 1 contiene
dos marcos de lectura abiertos, los cuales codifican para una probable RNA
polimerasa (280K) y para un polipéptido (24K) de función desconocida. El RNA 2
codifica un polipéptido de 54kDa de función desconocida y el RNA 3 expresa la
proteína de la cápside viral (CP) de 48 kDa.
Como objetivo de este proyecto nos propusimos obtener
plantas transgénicas de naranjo Dulce tolerantes o resistentes a la Psorosis mediante
expresión del gen de la cápside viral. Para ello, segmentos internodales de
tallos jóvenes de Naranjo Dulce Pineapple, fueron transformados mediante
inoculación con Agrobacterium
tumefaciens (EHA105)
conteniendo el gen CP de CPsV bajo el promotor 35S de CaMV (Cauliflower Mosaic
Virus) clonado
en el vector binario p35Sgusint. Los brotes regenerados fueron seleccionados
por reacción histoquímica para GUS e injertados in
vitro sobre un pie etiolado de Citrange Troyer (Citrus sinensis x Poncirus
trifoliata). Posteriormente se
realizó PCR de las plántulas crecidas in vitro para confirmar la
presencia de los genes virales. Las plántulas que resultaron positivas se
injertaron sobre un pie de Limóm Rugoso. Quince (15) líneas transgénicas
fueron obtenidas, de las cuales 9 se evaluaron por Southern blot y
TAS-ELISA. No se encontró correlación entre el número de copias del transgén y
la expresión de dicha proteína. Se han iniciado experimentos de desafío de
diferentes líneas para evaluar si han adquirido resistencia y/o tolerancia a Citrus
psorosis virus.