Identificación y caracterización de genes que afectan el color de la pasta (lipoxigenasas) a partir de una genoteca de trigo candeal.

GARBUS INGRID,; CARRERA ALICIA; MOIRANO NATALIA; DUBCOVSKY JORGE; ECHENIQUE VIVIANA

Viña del Mar, Chile

Congreso; VI Encuentro Latinoamericano y del Caribe de Biotecnología Agropecuaria REDBIO; 2007

REBDBIO

IDENTIFICACION Y CARACTERIZACION DE CLONES CON GENES DE LIPOXIGENASAS A PARTIR DE UNA GENOTECA DE TRIGO CANDEAL En trigo candeal, Triticum turgidum ssp durum,  el color amarillo del grano es un factor de calidad importante para la producción de pasta. Este color se debe al balance entre el contenido inicial pigmentos carotenoides en las semillas y su degradación oxidativa por acción de las enzimas lipoxigenasas (LOX). En trigo candeal, las isoenzimas de LOX fueron asignadas a los loci Lpx 1 (cromosoma 4), Lpx 2 (cromosoma 5) y Lpx 3 (cromosoma 4). Hemos demostrado la existencia de una duplicación del locus Lpx 1 en el cromosoma 4B (Lpx B1.1 y Lpx B1.2). El clonado de ADN exógeno en cromosomas artificiales de bacterias (BACs) es utilizado para construir bibliotecas de genomas completos. Contamos con una genoteca de BACs obtenida a partir de la variedad Langdon de trigo tetraploide (AABB), compuesta por 561.096 clones. El tamaño promedio de los insertos es 131 kb con una cobertura genómica de 5.1, siendo 99.4% la probabilidad de encontrar un gen de interés. Utilizando secuencias de genes Lox de cebada identificamos en esta genoteca 26 clones positivos para lipoxigenasas. El ADN plasmídico de estos clones fue aislado y amplificado mediante PCR con primers para los tres loci Lpx, encontrándose secuencias de los loci Lpx 1, Lpx 2 y Lpx 3 en 14, 3 y 16 clones respectivamente. Los fragmentos amplificados a partir de Lpx B1.1 y Lpx B1.2, no parecen juntos en ningún clon, mientras que es frecuente su combinación con Lpx 3. Esto nos sugiere que los loci Lpx B1.1 y Lpx B1.2 no se encuentran próximos, ubicándose probablemente Lpx 3 en una posición intermedia entre ambos. Esto será confirmado a través de la secuenciación de los clones. A partir de estas BACs, los genes individuales podrán ser estudiados en relación a su  ubicación relativa, secuencia y caracterización de sus promotores, permitiendo el diseño de primers específicos para su mapeo y estudios de expresión.