MODIFICACIÓN DE EXTRACTOS CON NH2OH: GENERACIÓN DE INHIBIDORES DEL SISTEMA PHOP/Q DE SALMONELLA

RAMALLO, IA; VIARENGO, G; RUA, F; GARCIA VESCOVI, E; FURLAN, RLE

Mar del Plata

Simposio; XX SIMPOSIO NACIONAL DE QUÍMICA ORGÁNIC; 2015

Sociedad Argentina de Investigación en Química Orgánica

La Diversificación Química de Extractos1 (DQE) utiliza mezclas naturales como material de partida para la generación de colecciones semisintéticas, permitiendo el reciclado de extractos inactivos frente a una dada actividad biológica. La mayoría de las estructuras de cualquier extracto natural comparten grupos funcionales de alta frecuencia (por ej. C=O). La transformación química de C=O produciría una alteración significativa de la composición química de cualquier extracto. Si los C=O son transformados en funcionalidades farmacofóricas (por ej. C=N) se aumentarían las chances de generar compuestos activos . Aplicando esta metodología se modificaron 19 extractos metanólicos con hidroxilamina clorhidrato. Las reacciones se llevaron a cabo con reactivo en exceso a reflujo en EtOH. Al término, los crudos de reacción se lavaron con DCM:H2O para dar lugar a 19 extractos modificados (EMs). Los EMs y sus extractos de partida se ensayaron bioautográficamente para evaluar actividad inhibitoria del sistema de virulencia PhoP/Q de Salmonella typhimurium.2 De todos ellos, el extracto de Paspalum dilatatum resultó ser el más interesante en cuanto a la magnitud del halo de inhibición. Dicho EM se sometió a un fraccionamiento bioguiado. El espectro EMAR de la fracción activa presentó los valores: 192,0572m/z correspondiente a C8H11NO3Na [M+Na]+, y 250,0975m/z correspondiente a [M+Na+NH3+C2H3N]+. El análisis de RMN mostró la presencia de 2 moléculas en relación 1:1,5. La mayoritaria se identificó como la oxima (E) del 5-(etoximetil)furan-2-carbaldehido, y la minoritaria como el isómero (Z). Estas oximas podrían haberse formado por deshidratación de algún azúcar presente en el extracto natural para dar 5-hidroximetil furfural y posterior reacción con NH2OH y con EtOH. Ambos isómeros fueron sintetizados y evaluados en cuanto a su capacidad de regular la actividad transcripcional sobre un gen regulado por el sistema PhoP/Q (virK) y sobre un gen control (tppB, regulado por otro sistema homólogo pero no relacionado funcionalmente). Los resultados mostraron represión dosis-dependiente sobre la actividad del gen virK, no observándose inhibición sobre el gen tppB, sugiriendo un efecto selectivo sobre el sistema PhoP/Q. Los compuestos evaluados no afectan el crecimiento de una cepa salvaje de S. Typhimurium a concentraciones ≤250 µg/mL, que son las utilizadas para los estudios.Estas oximas representan los primeros ejemplos de compuestos semisintéticos (a partir de una reacción no reportada hasta el momento para DQE) que inhibirían este importante blanco biológico. Posteriores estudios serán necesarios para para poder establecer si el efecto es a nivel de todo el regulón PhoP de S. typhimurium.Referencias:1-Ramallo, I. A.; Salazar, M. O. Acc. Chem. Res. 2011, 44, 241-250. 2-Salazar, M. O.; Viarengo, G.; Sciara, M. I.; Kieffer, P. M.; García Véscovi, E.; Furlan, R. L. E. Phytochem. Anal. 2014, 25, 155-160.