Síntesis dirigida por efecto biológico: caracterización de bibliotecas e identificación de un nuevo inhibidor de tirosinasa mediante EM

CABEZUDO, I; RAMALLO, IA; ALONSO, V; FURLAN RLE

San Luis

Congreso; IV Congreso Argentino de Espectrometría de Masa; 2022

Sociedad Argentina de Espectrometría de Masa

La inhibición del pardeamiento enzimático es un objetivo atractivo para elevar la calidad de los alimentos. Este trabajo describe una plataforma para el descubrimiento de inhibidores de tirosinasa, basada en (a) preparación de una biblioteca de tio(semi)carbazidas, (b) evaluación biológica usando bioautografía de tirosinasa en TLC y (c) identificación de inhibidores a través de espectrometría de masas (EM) acoplada a bioautografía. La bioautografía en TLC es un formato de ensayo especialmente adecuado para la evaluación de las propiedades de inhibición de enzimas útil para vincular datos cromatográficos y biológicos.Uno de los objetivos de este estudio fue evaluar bibliotecas por LC-MS para comprobar el funcionamiento de la química usada para su preparación. Otro fue el análisis de esas bibliotecas por bioautografía y EM asistida por algoritmos, para la identificación de inhibidores.Se mezclaron cantidades adecuadas de 8 aldehídos, tiosemicarbazida y tiocarbazida en EtOH y la mezcla e agitó durante 3 h a reflujo. El análisis de composición se realizó por LC-MS, utilizando gradiente de polaridad en fase reversa. Los espectros se leyeron con Thermo Xcalibur 2.2 SP1.48; cada espectro de masas comprendía 0,23 min de recopilación de datos promediados. Se detectaron 43 productos de tiocarbazona y tiosemicarbazona.Para obtener información sobre la identidad del compuesto responsable de la actividad observada en la biblioteca se aplicó la estrategia BioMSId.3 Es decir, las muestras de la biblioteca se corrieron en TLC usando tres sistemas de solventes diferentes, y luego se analizó la actividad de tirosinasa en las tres placas. Se tomaron muestras de las zonas de inhibición y del fondo de cada placa de TLC y se sometieron a análisis de MS. Los espectros obtenidos se procesaron con un algoritmo de MATLAB buscando señales comunes relacionadas con la estructura del compuesto activo.Por primera vez, la preparación de bibliotecas, la bioautografía en TLC y la espectrometría de masas se aplicaron en tándem para el descubrimiento de un compuesto bioactivo. La estrategia condujo a la identificación de un nuevo inhibidor de la tirosinasa con interesantes propiedades inhibidoras y efectos anti-pardeamiento que merece más estudios para evaluar su aplicabilidad