DETECCIÓN DE INHIBIDORES DE TIROSINASA EN MEZCLAS COMPLEJAS NATURALES Y SEMISINTÉTICAS

GARCIA, P; ZYGADLO, JA; FURLAN RLE

Mar del Plata

Simposio; XIX Simposio Nacional de Química Orgánica; 2013

Sociedad Argentina de Investigaciones en Química Orgánica

Los ensayos biológicos en formatos que facilitan la identificación y el aislamiento de compuestos activos a partir de mezclas complejas resultan herramientas clave para la investigación de productos naturales. Los métodos autográficos, al combinar separación cromatográfica con determinación de actividad in situ permiten la visualización en una placa cromatográfica del o de los constituyente/s activo/s presentes en mezclas. La tirosinasa (EC 1.14.18.1) es una enzima bifuncional cuprífera ampliamente distribuida en microorganismos, plantas y animales que cataliza la producción de melanina y otros pigmentos, por oxidación de tirosina. Sus inhibidores resultan atractivos por sus potenciales aplicaciones para la mejora del valor nutricional y la calidad de alimentos, el control de plagas de insectos, la prevención y el tratamiento de desórdenes de pigmentación y de otros problemas de salud relacionados con la melanina en humanos. Los pocos agentes antimelanogénicos disponibles comercialmente, tales como el ácido kójico y la arbutina, poseen elevada toxicidad celular y baja estabilidad frente al oxígeno y al agua, lo que limita sus aplicaciones.1 Por esto, con el objeto de facilitar el descubrimiento de nuevos inhibidores de tirosinasa se desarrolló un nuevo ensayo autográfico. Con el fin de aumentar la sensibilidad del ensayo y disminuir el límite de detección realizando un número mínimo de experimentos, durante este desarrollo se implementó un diseño experimental y se utilizaron técnicas de optimización logrando un límite de detección de 15 ng para el inhibidor conocido de la enzima, ácido kójico. Posteriormente, se comprobó la aplicabilidad del ensayo para la localización compuestos activos en una matriz compleja, investigando la presencia de ácido kójico en extractos vegetales crudos no inhibidores de la enzima y analizando extractos naturales con reportada actividad inhibidora como el extracto de Glycyrrhiza glabra.2 Paralelamente, se aplicó el ensayo para el análisis del perfil de actividad de mezclas semisintéticas generadas por bromación3 de aceites esenciales. En todos los análisis realizados se observó que la técnica es sencilla y permite analizar simultáneamente varias muestras en poco tiempo y con buena sensibilidad (para inhibidores conocidos), independientemente de la complejidad de las matrices utilizadas. Agradecimientos: CONICET, ANPCyT y Universidad Nacional de Rosario. Referencias: 1- Kim, Y. J.; Uyama, H. Cell. Mol. Life Sci. 2005, 62 (15), 1707-1723. 2- Simmler, C.; Pauli, G. F.; Chen, S.-N. Fitoterapia. 2013, en prensa. 3- ACS Comb. Sci. 2010, 13 (2), 200- 204.