LA NOVEL MAPK ERK5 ESTA INVOLUCRADA EN EL PROCESO DE UP-REGULATION DEL RECEPTOR B1 A CININAS EN VENA UMBILICAL HUMANA (VUH)

KILSTEIN, YAEL; NOWAK, WANDA; ERRASTI, ANDREA E.; COSENTINO, BÁRBARA; BASTOS PARRONDO, BRENDA; ARMESTO, ARNALDO R.; ROTHLIN, RODOLFO P.

Córdoba

Congreso; XLVII Reunión Anual de la Sociedad de Farmacología Experimental (SAFE); 2015

SAFE

<!-- /* Font Definitions */@font-face{font-family:"ＭＳ 明朝";mso-font-charset:78;mso-generic-font-family:auto;mso-font-pitch:variable;mso-font-signature:-536870145 1791491579 18 0 131231 0;}@font-face{font-family:"ＭＳ 明朝";mso-font-charset:78;mso-generic-font-family:auto;mso-font-pitch:variable;mso-font-signature:-536870145 1791491579 18 0 131231 0;}@font-face{font-family:Cambria;panose-1:2 4 5 3 5 4 6 3 2 4;mso-font-charset:0;mso-generic-font-family:auto;mso-font-pitch:variable;mso-font-signature:-536870145 1073743103 0 0 415 0;} /* Style Definitions */p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal{mso-style-unhide:no;mso-style-qformat:yes;mso-style-parent:"";margin:0in;margin-bottom:.0001pt;mso-pagination:widow-orphan;font-size:12.0pt;font-family:Cambria;mso-ascii-font-family:Cambria;mso-ascii-theme-font:minor-latin;mso-fareast-font-family:"ＭＳ 明朝";mso-fareast-theme-font:minor-fareast;mso-hansi-font-family:Cambria;mso-hansi-theme-font:minor-latin;mso-bidi-font-family:"Times New Roman";mso-bidi-theme-font:minor-bidi;}.MsoChpDefault{mso-style-type:export-only;mso-default-props:yes;font-family:Cambria;mso-ascii-font-family:Cambria;mso-ascii-theme-font:minor-latin;mso-fareast-font-family:"ＭＳ 明朝";mso-fareast-theme-font:minor-fareast;mso-hansi-font-family:Cambria;mso-hansi-theme-font:minor-latin;mso-bidi-font-family:"Times New Roman";mso-bidi-theme-font:minor-bidi;}@page WordSection1{size:8.5in 11.0in;margin:1.0in 1.25in 1.0in 1.25in;mso-header-margin:.5in;mso-footer-margin:.5in;mso-paper-source:0;}div.WordSection1{page:WordSection1;}-->Los receptores B1 no sondetectables en condiciones fisiológicas y su síntesis es inducida por diferentesestímulos, la injuria tisular o inflamación en condiciones in vivo, así como eltrauma tisular y la prolongada incubación en condiciones in vitro. Estos receptoresparticipan en la fase crónica de la inflamación. El objetivo del presentetrabajo fue evaluar la participación de la novel vía ERK5 así como tambiénERK1/2, JNK y p38 MAPK en el proceso de up-regulation del receptor B1 en VUH.Anillos de VUH se incubaron en solución de Krebs a 37°C, pH 7.4 y se trataroncontinuamente con distintas dosis de SB203580 o VX-702 (SB o VX, inhibidores dep38 MAPK), SP600125 (SP, inhibidor de JNK), BIX02188 (BIX, inhibidor de ERK5) yPD184352 (PD, inhibidor de ERK1/2). Tras 5h de incubación, se realizaron curvasconcentración-respuesta (CCR) a DAKD, agonista selectivo del receptor B1 y a unagonista no relacionado, 5-HT. También se realizaron CCR a DAKD tras 5h deincubación pero tratando los anillos con dosis efectivas de los inhibidoresúnicamente los últimos 15min previos a la realización de la CCR. A la vez, se realizaronensayos de qPCR, utilizando anillos de VUH incubados durante 5h en ausencia opresencia continua de los inhibidores mencionados. Finalmente, se evaluó elefecto del tiempo de incubación sobre la fosforilación de las distintas MAPK enVUH, así como el efecto selectivo de los inhibidores de MAPK sobre dichafosforilación mediante Western Blot. Resultados: SB10 μΜ y VX 0.2 μΜ producenun corrimiento significativo de la CCR a la derecha sin disminuir el efectomáximo a DAKD (Emax). Mientras que SP1μM no modifica la CCR, con 3μM produce uncorrimiento significativo de la CCR a la derecha sin disminuir el Emax. Estomismo se observa con BIX10 μM. Por otro lado, la corta exposición a losinhibidores no produce modificaciones significativas en la CCR a DAKD y lacontinua exposición en dosis funcionalmente efectivas durante 5h no modifica laCCR a 5-HT. Estos resultados indicarían la falta de toxicidad sobre lacontractilidad de la VUH así como sobre la transducción de la señal delreceptor B1. Consistentemente, se observa en las qPCR que en presencia de estosinhibidores hay una disminución significativa en la expresión del ARNm delreceptor B1 tras 5hs de incubación. Ni PD 0.1μM o 1μM modifican las CCR a DAKDtras 5h de incubación ni afectan la concentración del ARNm del receptor B1. Laincubación de VUH produce una marcada fosforilación tiempodependiente de ERK5, JNK y p38 que desaparece tras las primeras 3h deincubación. A la vez se confirma mediante Western Blot la especificidad y elefecto de los inhibidores sobre sus blancos. Los resultados indican que lasvías ERK5, p38, y JNK participan en el proceso de up-regulation del receptor B1.Consistentemente con lo publicado en tejidos humanos, ERK1/2 no sería relevanteen este fenómeno. Por otro lado, se evidencia por primera vez la relación entrela novel isoforma ERK5 y el up-regulation B1.