Presencia de MDR (multidroga resistencia)y del regulador de la conductancia de la fibrosis quística (CFTR) en células K562

ASSEF YANINA; KUSNIER, CARLOS; DAMIANO, ALICIA E; IBARRA CRISTINA; KOTSIAS BASILIO

Mar del Plata

Congreso; Reunion anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clinica; 2000

SAIC

La distribución de la proteína MDR (multidroga resistencia) es complementaria a la del regulador de la conductancia de la fibrosis quística (CFTR). Nuestros objetivos fueron identificar estas proteínas en la línea celular K562 proveniente de una leucemia mieloide crónica humana y luego correlacionar su presencia con los canales iónicos presentes en las mismas. Para ello se purificó el ARN total y por RT-PCR, utilizando sondas que flanquean secuencias de nucleótidos altamente conservadas para cada uno de los genes, se amplificaron dichas secuencias. Se observó la presencia de bandas correspondientes a las secuencias amplificadas de CFTR y MDRI. Con "patch-clamp" (configuración "cell- attached") (n=5) con soluciones simétricas en la pipeta y en la solución extracelular (140 NaC1) se ìdentificó un canal que fue activado por el agregado de forskolina (40 uM). Luego de la excisión de estos parches activados, las transiciones de corriente indicaron un canal con una conductancia de 38 pS no altamente rectificante (n=6). El potencial de reversión (Er) mostró un corrimiento hacia valores más negativos luego del reemplazo del C1- por gluconato, con una perm-selectividad gluconato/C1 de 0.32 + 0.06. EI reemplazo del Na+ por NMDG (n=5) no modificó el Er. Nuestros resultados sugieren que las características de los canales iónicos observados podrían ser atribuidos a un comportamiento no descripto del CFTR y/o MDR en ovocitos de Bufo. Sin embargo los experimentos realizados no permiten descartar si se trata de un canal aniónico aún no identificado.