Expresion de transportadores de urea en sinciciotrofoblasto de placenta humana

DAMIANO ALICIA E; ZOTTA ELSA; GODOY SEBASTIÁN L; IBARRA CRISTINA

Tafí del Valle

Congreso; Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2001

SAB

El feto se desarrolla en un útero rodeado por líquido amniótico el cual es inicialmente isotónico con el plasma pero se vuelve progresivamente hipotónico a medida que la gestación avanza. Así, la concentración de sodio disminuye mientras que las concentraciones de urea y creatinina aumentan como consecuencia de una regulación controlada principalmente por el riñón fetal y por la disminución de la permeabilidad a la urea a nivel del amnios. La urea es un producto final del metabolismo proteico que se excreta desde el feto a la madre a través del sinciciotrofoblasto (STh). Si bien los estudios realizados con vesículas de membranas apicales y basales de STh indican que la urea permea por un mecanismo de difusión simple, la presencia de transportadores de urea no puede ser descartada dado que se trata de una molécula altamente polar con baja permeabilidad a través de la bicapa lipídica. El objetivo de este trabajo fue investigar el mecanismos molecular del transporte de urea a través del STh usando técnicas de RT-PCR, western blots e inmuhistoquímica. Una banda de 500 bp fue obtenida usando RNA total del STh y oligonuceótidos ?primers? degenerados que flanquean la zona conservada de Lp box de transportadores de urea tipo UT. El analisis de western blots usando un anticuerpo especifico anti UT-A reveló tres bandas de 42, 53 y 70 kDa tanto en placentas de primer como de tercer trimestre. Ensayos de deglicosilación con endoglicosilasa H indicaron que las bandas mayores a 42 kDa corresponden a las formas glicosiladas de la proteína. Por estudios de inmunohistoquímica se detectó la presencia de transportadores de urea tipo UT-A en la membrana apical del STh de primer y tercer trimestre aunque con intensidades diferentes. En placentas de tercer trimestre la marcación se hizo menos evidente. Estos resultados sugieren que uno de los factores que determinan el aumento de la concentración de urea a nivel del líquido amniótico podrían estar relacionados con la disminución de la permeabilidad a la urea de la barrera del STh a medida que avanza la edad gestacional. Futuros experimentos funcionales serán necesarios para clarificar este punto. Es por ello que se cultivaron sobre soporte permeable células JEG3 aceptadas como modelo de STh. Estas células expresan transportadores de urea tipo UT identificados por técnicas de biología molecular.