Transcriptos de Integrina beta 1 son procesados alternativamente para producir ARN mensajeros de diferente longitud durante el desarrollo de la glándula mamaria.

MARTIN GARCIA SOLÁ; JULIAN NAIPAUER; EDITH C. KORDON; OMAR A. COSO

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2013

Sociedad Argentina de Investigación Clínica.

Las integrinas son receptores de membrana heterodiméricos que constituyen la principal conexión entre la célula y el ambiente, jugando un rol crítico en el desarrollo normal y neoplásico de diferentes tejidos. La caracterización del ARNm de integrina β1 de ratón (Itgb1) reveló en el 3?UTR, una señal proximal de poliadenilación alternativa (PAS1) que produce un ARNm 578pb más corto (Itgb1-C) que el conocido (Itgb1-L) generado por utilización de la señal distal (PAS2). Aunque presentan una localización diferente, PAS1 y PAS2 son idénticas entre sí. Los niveles de expresión para cada isoforma están determinados, al menos en parte, por el uso alternativo de estas señales durante los diferentes estadíos del desarrollo de la glándula mamaria, siendo generalmente Itgb1-L más abundante que Itgb1-C. Para estudiar los mecanismos regulatorios que determinan la selección de dichas señales, utilizamos un plásmido reportero derivado de pRiG. Este vector provee un sitio múltiple de clonado (MCS) precedido por la secuencia codificante de la proteína roja fluorescente y seguido por un sitio interno de entrada del ribosoma y la secuencia codificante de la proteína verde fluorescente. En el MCS se insertaron las secuencias PAS1 y PAS2, rodeadas cada una de su entorno nucletídico (200bp). Células mamarias HC11 fueron transfectadas con estos constructos y analizadas por citometría de flujo. Los resultados muestran que la señal PAS2 funciona como una señal fuerte, de elección más frecuente que la PAS1, lo cual es coherente con los niveles de expresión de las dos isoformas en mama. Asimismo, estos datos indican que el entorno nucleotídico que rodean las señales de corte y poliadenilación ejercen una importante influencia en la selección y uso de las mismas. Creemos que las herramientas moleculares presentadas aquí brindan una excelente oportunidad de investigar los mecanismos que regulan la elección de diferentes sitios de poliadenilación alternativa según el contexto celular.