Evaluación de la técnica de recuento por microgota para la cuantificación de formulaciones conteniendo Azospirillium brasilense

RIVERA, DIEGO; MOLINA, ROMINA; OBANDO, MELISSA; TORRES, DANIELA; CASSÁN, FABRICIO

Córdoba

Jornada; XV Jornadas Argentinas de Microbiología. Adelantos en el diagnóstico Microbiológico.; 2014

Asociación Argentina de Microbiología

Azospirillum es uno de los géneros de rizobacterias más estudiados debido a su capacidad de promover el crecimiento vegetal. La cepa Az39 de A. brasilense es una de las más utilizadas para la formulación de inoculantes en Argentina y el control de calidad de tales formulaciones, juega un papel clave al momento de asegurar su funcionalidad en condiciones agronómicas. El objetivo de este trabajo fue evaluar la precisión y practicidad de la técnica de recuento por microgota para la cuantificación de Azospirillum brasilense, utilizando como medio de cultivo agar Luria Bertani modificado por la adición del indicador Rojo Congo [LBRC]. Para este desarrollo experimental, se emplearon la técnica de recuento tradicional por siembra en superficie versus la técnica de recuento por microgota de manera comparativa en los siguientes medios de cultivo: Luria Bertani [LB], Rojo Congo [RC], Nitrogen Free [NFb] y Luria Bertani-Rojo Congo [LBRC] cuya formulación se describe en otro resumen de estas jornadas. Para ello, la cepa Az39 de A. brasilense se inoculó al 1% (v/v) en caldo LB durante 24 horas con agitación a 180 rpm y una temperatura de incubación de 37±2°C. Una vez alcanzada la fase exponencial correspondiente a una DO595=1.0-1.2 y un recuento aprox. de 1E+9 UFC.ml-1, se realizaron diluciones decimales hasta alcanzar 10-6 y se sembraron 100 µl por placa de las diluciones 10-5 y 10-6 para la técnica clásica y 4 deposiciones de 20 µl por placa para la técnica de microgota en las mismas diluciones. Ambas metodologías fueron reproducidas por triplicado. Una vez sembradas, las placas fueron incubadas de forma invertida a 37±2°C durante 48-72 horas, momento en el que se desarrolló el recuento. Para la interpretación de los resultados, se realizó un análisis de varianza (ANOVA)  seguido de un Test HSD Tukey´s, con un nivel de confianza del 95 %, empleando el software SAS 9.0 para Windows. Se realizaron controles de pureza sobre la base de caracterización morfológica de la cepa Az39. De acuerdo a nuestros resultados, no se observaron diferencias significativas cuando se compararon los medios de cultivo entre sí para una misma metodología, pero sí una tendencia de menor recuperación para el medio NFb en ambos procedimientos. Cuando se realizó el análisis comparativo entre la técnica clásica versus la técnica por microgota, fueron evidenciadas diferencias estadísticamente significativas (P<0.05) ya que se determinó que la técnica de microgota presentó una mayor precisión, evidenciada como menor dispersión de datos y mayor título de recuento, en comparación con la técnica de recuento tradicional. Se concluye así, que la técnica de microgota podría ser empleada de rutina en control de calidad de formulaciones que contienen Azospirillumbrasilense debido a su mayor confiabilidad, menor costo y mayor simplicidad experimental, contribuyendo así a una mejora en los procedimientos de control de calidad de inoculantes para este microorganismo.