INVESTIGADORES
CASSAN Fabricio Dario
congresos y reuniones científicas
Título:
Utilización de un medio de cultivo para la cuantificación de Azospirillum brasilense y la diferenciación de bacterias presentes en la misma formulación.
Autor/es:
MOLINA, ROMINA; OBANDO, MELISSA; TORRES, DANIELA; RIVERA, DIEGO; CASSÁN, FABRICIO
Lugar:
Córdoba
Reunión:
Jornada; XV Jornadas Argentinas de Microbiología. Adelantos en el diagnóstico Microbiológico.; 2014
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
Azospirillum es uno de los géneros de rizobacterias más
estudiados de los últimos años debido a su capacidad de promover el crecimiento
en un gran número de especies vegetales de todo el mundo, lo que ha devenido en
su utilización desde el punto de vista agronómico. La cepa Az39 de A. brasilense es una de las más
utilizadas para la formulación de inoculantes en Argentina y el control de calidad
de tales formulaciones, juega un papel clave para asegurar su funcionalidad en
condiciones agronómicas. En la actualidad, existen procedimientos validados
para la cuantificación de Azospirillium
brasilense, que incluyen el procedimiento de recuento y otros procedimientos
adicionales para la identificación de microorganismos contaminantes. El objetivo
de este trabajo fue el de evaluar un medio de cultivo de fácil preparación, que
permitiese integrar el procedimiento de recuento y la identificación de microorganismos
contaminantes en una misma secuencia de trabajo. Para ello, utilizamos la cepa
Az39 de Azospirillum brasilense como cepa de referencia y las técnicas de recuento
por microgota y de siembra en superficie como procedimientos analíticos estándares.
El medio de cultivo se formuló sobre la base del caldo Luria Bertani [LB] modificado
por la adición de 15g.L-1 del indicador Rojo Congo y 18 g.L-1 de
agar y fue denominado LBRC. Para los ensayos, se obtuvieron cultivos en fase
exponencial de Sinorhizobium meliloti, Bradyrhizobium japonicum, Pseduomonas
protegens y Bacillus subtilis que
fueron mezclados en una relación al 50% (v/v) con cultivos en igual fase
de crecimiento [DO595=1.0 y aprox. 1x109 UFC.ml-1] de Azospirillum
brasilense Az39. Además se consideraron controles de cada
microorganismo sembrados de manera individual en los medios propuestos: Rojo
Congo [RC]; Nitrogen Free [NFb] y LBRC. Los
resultados de nuestros experimentos determinaron que ambos medios, LBRC y RC permitieron
diferenciar colonias de Azospirillum brasilense de aquellas formadas por S. meliloti, P. protegens y B. subtilis a diferencia de lo
que ocurrió en medio NFb, en el que no se pudieron diferenciar colonias de cada
género microbiano. Por otra parte, B. japonicum fue incapaz de
desarrollarse en todos los medios propuestos. El medio LBRC tiene dos ventajas
considerables con respecto al medio RC considerado selectivo y diferencial para
el género Azospirillum: es de fácil preparación y no es selectivo, por
lo que permitiría el desarrollo de microorganismos contaminantes con mayores
requerimientos nutricionales y no con los comúnmente utilizados para la
formulación de inoculantes, como los empleados en nuestros ensayos. En base a estos resultados, proponemos que el
medio LBRC es adecuado para el recuento de Azospirillum brasilense y la detección de otros microorganismos en un mismo
procedimiento.