Inmovilización de peroxidasa de cáscara de soja sobre polianilina para depuración de fenoles

MAGRI, MARÍA L; MIRANDA, MARÍA V; OSVALDO CASCONE

San Miguel de Tucumán

Congreso; Simposio Internacional de Biotecnología; 2004

  La peroxidasa de cáscara de soja (SBP) constituye una enzima de gran interés debido a su mayor estabilidad con respecto a otras peroxidasas y a su gran disponibilidad en nuestro país por obtenerse de desechos de la industrialización de la soja. Esta enzima ha sido aplicada a sistemas de biorremediación de fenoles en forma soluble; su inmovilización facilita la recuperación de la enzima y mejora los perfiles de actividad. En particular, la polianilina (PANI) constituye un polímero orgánico de gran interés por su estabilidad ambiental y su propiedades rédox, que le permiten adquirir diferentes estados de oxidación con gran facilidad. Asimismo, resulta adecuado para la inmovilización de enzimas por su facilidad de preparación, alto rendimiento sintético, termoestabilidad y resistencia a la degradación química y microbiana.       En este trabajo se sintetizaron diferentes PANIs. Para ello, se partió de la obtención de un PANI dopado con ácido mediante la oxidación de anilina con persulfato de amonio en medio 2 M HCl (PANI 1). Se procedió a modificar su estado rédox mediante el agregado de NH4OH (PANI 2), ácido nítrico (PANI 3) y ácido cítrico (PANI 4) sucesivamente. Además, se sintetizó un PANI altamente oxidado a partir de una solución de anilina y KMnO4 (PANI 5). Estos cinco PANIs fueron el punto de partida para el ensayo de inmovilización de SBP. Se activaron con glutaraldehído y se procedió a realizar un screening de sus capacidades de inmovilización en condiciones standard. Se observó que PANI 2 unía hasta 50% de la actividad enzimática, mientras que los demás PANI no superaban el 20 %.       Teniendo en cuenta este resultado se determinó el pH óptimo para la inmovilización de la enzima sobre PANI 2 activado, que resultó ser pH 6. Asimismo, se realizó una cinética de inmovilización a pH óptimo, que evidenció la necesidad de incubar 6 h para alcanzar la saturación del polímero. Un ensayo de eficiencia permitió determinar que 32,3 % de la actividad enzimática y 39,3 % de proteína se inmovilizan en el polímero, por lo cual la eficiencia de inmovilización fue del 82 % y la actividad específica final de la enzima de 810 U/mg polímero. El ensayo de reutilización permitió comprobar que la enzima mantenía su actividad a lo largo de 2 meses. Todos los ensayos se realizaron por quintuplicado y se realizaron controles negativos con PANI no activado con glutaraldehído.       La enzima inmovilizada será utilizada en ensayos de depuración de fenoles y se determinará el perfil de actividad para la enzima inmovilizada.