Separación de proteínas en mezclas biológicas complejas mediante procesos continuos de extracción líquido-líquido

R. CABRERA; R. STUMPO; P. LÓPEZ; G. FERRARO; O. CASCONE; H.M. FERNÁNDEZ LAHORE

REVISTA DE LA FACULTAD DE BIOQUÍMICA Y CIENCIAS BIOLÓGICAS DE LA UNL

Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas

Lugar: Santa Fe; Año: 2001 vol. 5 p. 107 - 118

0329-5559

  La cromatografía en contracorriente (CCC) se basa en un procedimiento repetido de extracción líquido-líquido y encuentra usos en la separación de productos naturales. A efectos de una CCC es posible retener la fase líquida estacionaria mediante aplicación de fuerza centrífuga sobre un tubo espiralado que rota sobre su propio eje y simultáneamente sobre el eje del rotor. De esta forma es posible obtener separaciones cromatográficas en ausencia de un soporte sólido. En este trabajo, extendemos la aplicación de la CCC al fraccionamiento de macromoléculas mediante el uso de sistemas de dos fases acuosas (ATPS). Utilizando columnas semipreparativas a una velocidad de rotación constante (1000 rpm), hemos obtenido retenciones de alrededor de 35% de la fase superior de un ATPS formado por polietilenglicol 1540 (12,5%) y fosfatos (12,5%). Dicho nivel de retención es estable en el tiempo y corresponde a un valor 1,8 para la relación de volúmenes de fases, lo que compara ventajosamente con el de la cromatografía en columna. La optimización del sistema CCC permitió separar mezclas artificiales de proteínas y su aplicación al fraccionamiento de un suero equino hiperinmune. Estos resultados abren la posibilidad de realizar separaciones de proteínas mediante CCC/ATPS y el posterior escalado de la metodología propuesta en separadores industriales.